Unidad de Posgrado Medicina Veterinaria

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Caracterización molecular de Pasteurella multocida aislada de alpacas con signos de neumonía
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2016) Rimac Beltrán, Rocío; Maturrano Hernández, Abelardo Lenin
Caracteriza molecularmente 24 aislados de P. multocida provenientes de alpacas con neumonía, identificados por pruebas bioquímicas y mediante la prueba de PCR a travez de la amplificando del gen kmt1 presente solo en esta especie. Posteriormente se realizó la tipificación capsular mediante la técnica de PCR múltiple obteniéndose que todos los aislados pertenecen al tipo capsular A. La tipificación en base al antígeno LPS, el cual permite la clasificación de P. multocida en 16 serovares agrupados en 8 genotipos, resultó en que los aislados de este estudio pertenecieron al genotipo LPS L6, correspondiente a los serovares 10, 11, 12 y 15. Además, se analizó la presencia de 4 genes codificantes de factores de virulencia (toxA, tbpA, pfhA y hgbB), detectándose en todos los aislados los genes toxA (100%) y tbpA (100%). Para evaluar la diversidad entre los aislados, se emplearon las técnicas BOX-PCR y ERIC-PCR, los cuales fueron analizados por el programa NTSYSpc 2.10 para el desarrollo de los dendogramas mostrando baja diversad entre los aislados de alpaca, corroborado por el agrupamiento de 23/24 aislados en un único cluster.
Correlación entre los patrones de expresión del gen protamina 3 y 1 con parámetros de función espermática en alpacas
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2023) Ugarelli Galarza, Martha Alejandra; Santiani Acosta, Alexei Vicent
Correlaciona los niveles de expresión de las variantes PRM3 y PRM1 con parámetros de función espermática en alpacas. Para esto se emplearon 47 testículos con sus respectivos epidídimos. Para la expresión, se obtuvo la muestra directamente de tejido testicular mientras que, los espermatozoides para la evaluación de la función espermática se recuperaron de la cola del epidídimo de los mismos testículos Primero se diseñaron los cebadores (fordward y reverse) in silico, de la PRM3 en base a la secuencia predicted dentro del NCBI, y para el gen PRM1 mediante el alineamiento de las secuencias homologas del gen en especies filogenéticamente relacionadas. Los cebadores seleccionados fueron corridos en gel de agarosa para visualizar la coincidencia de amplicones, quedándonos solo con un par de cebadores del gen PRM3. Los niveles de expresión relativa de este gen fueron de 79 con un Ct value de 32.75, lo que nos indica que poseen una expresión alta. Además, se encontró correlación significativa de -0.85 entre la expresión del gen y la ausencia de protaminas (p<0.005); sin embargo, la correlación entre la expresión relativa del gen PRM3 y parámetros de integridad acrosomal, viabilidad y potencial de membrana mitocondrial no fueron significativos. Con este estudio se pudo determinar la presencia del gen protamina 3 en alpacas; además se determinó que la expresión del gen PRM3 fue alta, lo que indica alta producción de protamina 3 en el espermatozoide de alpaca.
Desarrollo ontogénico de las placas de Peyer del íleon en alpacas (Vicugna pacos)
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2024) Flores Mendoza, Jimmy; Barrios Santos, William Arthur
Con el objetivo de describir los eventos ontogénicos de las placas de Peyer (PP, Peyer’s patches) del íleon de la alpaca. Se estudiaron 82 muestras de íleon de especímenes fetos, crías y adultos utilizando técnicas de anatomía, histología y microscopía electrónica de barrido, las que fueron analizadas en las Facultades de Medicina Veterinaria, y Biología de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos – Perú, y en la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad de São Paulo – Brasil. Los resultados mostraron que, las PP del íleon fueron estructuras discretas y aisladas, bajo dos tipos notoriamente diferentes: las PP de tipo copa en la porción proximal y las de tipo conos-crateriformes en la porción distal; ademas que, la disposición de los compartimentos linfoides fue influenciada por el tipo de PP en todo el proceso ontogénico. En la etapa prenatal, la cavidad crateriforme, fue evidenciable a partir de la 14.a semana de gestación; mientras que, la estructura de copa lo fue a la 37.a semana. La ontogenia de las PP, inició a partir de la 22.a semana, con la observación de las células de morfología linfoide en el complejo lámina propia-submucosa; a la 28.a semana, se observó el primer esbozo de un folículo linfoide solitario; y a la 34.a semana, dos esbozos de folículos linfoides continuos; no obstante, la formación de las PP como tal, ocurrió a partir de la 37.a semana, para que, en fetos de 46.a semana, estuvieran completamente desarrolladas. En la etapa postnatal, se observó la formación de los centros germinales (GC, germinal center) en algunos folículos linfoides durante la primera semana de vida, entre la 3.a a la 6.a semana los GC estuvieron en casi la totalidad de ellos. En adultos menores de 6 años, aunque el desarrollo en ambos tipos de PP fue progresivo, en un especímen se observó atrofia del tejido linfoide principalmente en el área folicular. El epitelio asociado a folículo se diferenció del epitelio del íleon, a partir de la 34.a semana, estuvo compuesto por epitelio simple cilíndrico, que careció de células caliciformes; no obstante, presentó abundantes células de morfología linfoide y escasas células M; la presencia de estas dos últimas líneas celulares fue confirmada por microscopía electrónica de barrido. Se concluye que, las PP del íleon de la alpaca son particulares, principalmente las de tipo conos-crateriformes, las mismas que, a excepción de camélidos del viejo mundo, no fueron reportados en otras especies de mamíferos. Por otro lado, los eventos ontogénicos durante la etapa prenatal y perinatal, son similares a los mamíferos domésticos y roedores de laboratorio, aunque con diferencias en el tiempo de ocurrencia; mientras que, en la etapa adulta, si bien, se evidencia atrofia, no se confirma la involución completa de las PP.
Dinámica de excreción de ooquistes de Eimeria spp. en alpacas madres durante la temporada de parición en el CIP la Raya, Puno
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2024) Enriquez Añamuro, Carlos Vladimir; Rosadio Alcántara, Raúl Héctor
Se colectó la información de 50 alpacas gestantes de raza Huacaya clínicamente sanas con edades de 3 a 12 años, las que fueron distribuidas en tres grupos etarios o categorías (C: 3-4, D1: 5-8, D2: 9-12 años) durante la temporada de parición, estableciéndose la dinámica de excreción en un periodo de 7 semanas (2 semanas preparto a 4 semanas post parto) en la estación experimental La Raya, Puno. Las muestras se procesaron mediante la técnica de Flotación en solución saturada de azúcar (solución de Sheather) para hallar la presencia de ooquistes y el método de McMaster en solución saturada de azúcar para determinar la carga de ooquistes por gramo de heces (opg) de Eimeria spp. Se identificó cuatro (E. punoensis, E. alpacae, E. lamae, E. macusaniensis) de las cinco especies reportadas en camélidos sudamericanos, lo que reafirma el papel de los animales adultos como reservorios o portadores. En el estado fisiológico del post parto se determinó una diferencia significativa entre las dos semanas preparto y todas las de posparto, así como entre una semana previa al parto con la semana durante el parto y posparto, y entre la semana del parto con la segunda y tercera semana posparto, en la que se reportó el recuento más elevado de opg. Del muestreo periódico de los 50 animales durante las siete semanas, se detectó un rango de carga total de las muestras oscilando desde 50 hasta 1850 opg, encontrándose diferencia significativa en los opg entre las distintas especies, siendo E. alpacae y E. punoensis las más frecuentemente excretadas. Se realizó una comparación de los Intervalos de confianza al 95% de cada categoría y del promedio de opg en cada categoría E. punoensis presentó una prevalencia mayor en 15% respecto a E. alpacae (p<0.001; IC95% 1.08-1.22). E. macusaniensis presentó una prevalencia menor en 95% respecto a E. alpacae (p<0.001; IC95% 0.03-0.08). E. lamae presentó una prevalencia menor en 80% respecto a E. alpacae (p<0.001; IC95% 0.15-0.25). La carga de opg de E. alpacae y E. punoensis fue estadísticamente similar en las dos semanas previas al parto, así como entre E. macusaniensis y E. lamae. Sin embargo, a partir del parto hasta la semana 4 posparto se observó diferencia estadística entre E. alpacae y E. punoensis
Evaluación de dos métodos enzimáticos para aislamiento de células primarias de placenta de alpaca (Vicugna pacos)
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2019) Cisneros Huamaní, Carlos Enrique; Santiani Acosta, Alexei Vicent
Evalúa dos métodos enzimáticos para el aislamiento de células primarias de placenta de alpaca (Vicugna pacos) utilizando colagenasa y tripsina como agentes disgregantes. Para este fin, se utilizó como control negativo el aislamiento de las células de alpaca por el método de explante. En los dos grupos de experimentación y en el grupo control se evaluó el número de células vivas post disgregación, observación morfológica de las células, cinética de crecimiento y expresión de cuatro genes de pluripotencia: Oct4, Sox2, c-Myc y Nanog. Se colectaron 25 placentas de alpaca obtenidas en el camal municipal de la ciudad de Huancavelica, departamento de Huancavelica, en los meses de agosto del 2018 hasta Junio del 2019. Para ambos grupos se obtuvo 10g de tejido de las 25 placentas de alpaca obtenidas del corion fetal. Para el control negativo se obtuvo los 10g de 5 placentas de alpacas tornadas al azar. Los resultados muestran que el número de células vivas obtenidas con la enzima colagenasa y tripsina fue de 6.37x105 y 5.12x104 células/g de tejido, respectivamente. La morfometría de las células mediante el empleo de colagenasa y en el método explante, mostraron incremento de longitud y ancho mayores a 82% y 25%, respectivamente con respecto a sus cultivos iniciales. En cuanto a la cinética de crecimiento evidenciaron un nivel de doblaje poblacional de 60.26 ± 4.9 y 66.75 ± 0.08 hrs, respectivamente. La expresión de los factores de transcripción de Oct4, Sox2, cMyc y Nanog por el método colagenasa mostraron niveles de expresión relativa de 5.97, 1.76, 0.71 y 81.68 respectivamente. En conclusión, se obtuvo mayor rendimiento de células primarias de placenta de alpaca con el método colagenasa, y los parámetros de morfometría, cinética de crecimiento y expresión de genes de pluripotencia evaluados, denotan signos de envejecimiento celular de acuerdo a las condiciones de cultivo realizados, denotando sólo así al gen Nanog, el gen que muestra mayor expresión relativa a diferencia de los demás genes evaluados.
Respuesta inmune celular en la mucosa intestinal de crías de alpacas (Vicugna pacos) clínicamente sanas
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2016) Watanabe Watanabe, Raquel Andrea; Manchego Sayán, Alberto Gustavo
Evalúa cuantitativamente la expresión de los ARN mensajeros (ARNm) de los factores de transcripción T-bet, STAT-1 y STAT-4 y de las citoquinas interleucina (IL) 12, IL-2, interferón gamma (IFN-γ) y factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α) involucrados en la activación y desarrollo de los linfocitos Th1 de la mucosa intestinal de crías de alpacas (Vicugna pacos) de tres grupos de 1-8, 10-21 y 22-47 días de edad, alimentadas en rebaños con pasto natural en la sierra sur del Perú. Obtiene muestras de una longitud de 2 cm de la porción media del yeyuno de crías de alpacas clínicamente sanas de la Estación IVITA Maranganí (Cusco, Perú), las que fueron almacenadas a -196°C y procesadas en el Laboratorio de Inmunología de la Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos (Lima, Perú). Extrae los ARN totales y desarrolla la PCR tiempo real con transcripción inversa (RT-PCR). Mide los valores de Ct (ciclo umbral, cycle treshold) y Tm (temperatura de disociación, temperatura de melting) de los productos del RT-PCR y emplea la técnica de cuantificación relativa 2-ΔΔCt a fin de evaluar la expresión de los ARNm de los factores mencionados respecto al control calibrador (fetos) en los tres grupos etáreos, empleándose como gen constitutivo de referencia a GAPDH. Las expresiones de T-bet, STAT-1 y STAT-4 muestran una tendencia positiva proporcional a la edad, siendo de 35, 6 y 3 veces lo expresado por el calibrador el grupo de 22-47 días de edad, respectivamente. Asimismo, las cinéticas de expresión en IL-2, IFN-γ y TNF-α muestran una tendencia positiva proporcional a la edad siendo de 26, más de cien y 5 veces lo expresado por el calibrador en el grupo de animales de 22-47 días de edad, respectivamente (p0.05). Concluye que la expresión de T-bet y STAT-1, factores transcripcionales activados por interferón gamma, se incrementa con la edad, así como también de las citoquinas involucradas en la respuesta inmune Th1, a diferencia de la expresión de STAT-4 e IL-12 que estadísticamente no difiere significativamente en los tres grupos etarios.

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