Facultad de Ciencias Biológicas

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Caracterización bioquímica de lectinas de semillas de Lupinus mutabilis sweet (tarwi) y evaluación de su potencial inmunomodulador sobre leucocitos polimorfonucleares humanos de sangre periférica
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2017) Rodriguez Carnero, Luis Antonio; Alzamora Gonzales, Libertad
Analiza la extracción y purificación de lectinas de semillas de Lupinus mutabilis del ecotipo Patón Grande, se evalúa su actividad hemaglutinante, se caracteriza bioquímicamente y se determina su efecto sobre leucocitos polimorfonucleares.
Citotoxicidad de un extracto con fucoidanos obtenidos de algas pardas sobre la línea celular HEP-2 (Human Epidermoid Carcinoma strain 2)
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2018) Horna Jauregui, Mónica; Alzamora Gonzales, Libertad
El cáncer es un conjunto de enfermedades genéticas y epigenéticas, en el que se observa la proliferación exacerbada de células, las cuales suelen invadir diferentes tejidos. Este problema de salud pública es una de las principales causas de morbilidad y mortalidad en nuestro país. Los tratamientos convencionales son la quimioterapia y la radioterapia; sin embargo, estos causan efectos secundarios perniciosos contra células saludables. Debido a esto, continúa la búsqueda de nuevas alternativas terapéuticas o complementarias a las terapias convencionales. El objetivo del estudio fue evaluar la actividad citotóxica de un extracto rico en fucoidan obtenido del alga parda Lessonia trabeculata y como control, fucoidan de Fucus vesiculosus. El extracto de Lessonia trabeculata contiene 80.4% de fucoidan y fue proporcionado por el Instituto de Bioquímica y Biología Molecular de la UNALM y el extracto control de Fucus vesiculosus 95% de fucoidan. La actividad citotóxica se realizó empleando la línea celular tumoral de origen humano Hep-2 (Human epidermoid carcinoma strain 2) y como control de células normales se utilizó VERO-76. Se probaron diferentes concentraciones del extracto y doxorrubicina (control positivo). La actividad citotóxica fue evaluada por el ensayo MTT ((Bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5 difeniltetrazolio) determinándose el porcentaje de inhibición. Para la inducción de apoptosis se realizó el ensayo de Anexina V. La concentración mínima inhibitoria (IC50) del extracto rico en fucoidan de Lessonia trabeculata fue de 6.42mg/ml para la línea celular Hep-2. Se demostró que la apoptosis de células Hep-2 fue superior al 20% (p <0.0001) respecto al cultivo sin tratar. La IC50 del extracto de fucoidan de Fucus vesiculosus fue mayor a 10 mg/ml para línea celular Hep-2. Se concluye que, el extracto rico en fucoidan de Lessonia trabeculata tiene actividad citotóxica frente a la línea celular tumoral Hep-2.
Comparación de la actividad de extractos de Lepidium peruvianum Chacón (maca) sobre leucocitos procedentes de individuos saludables e infectados con el virus de la inmunodeficiencia humana (HIV)
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2010) García Hurtado, Jacquelin; Alzamora Gonzales, Libertad
La infección con el virus de la inmunodeficiencia humana (HIV), causa una profunda inmunodepresión que expone a las personas infectadas a diversas infecciones oportunistas. Lepidium peruvianum Ch. presenta varias propiedades como, su capacidad estimulante de la reproducción y energizante, investigaciones recientes han demostrado su capacidad antitumoral e inmunoestimulante. El objetivo del presente trabajo fue determinar la actividad de tres tipos de extractos (clorofórmico, acuoso y metanólico) de L. peruvianum Ch. en cultivos de leucocitos de personas saludables y HIV-1+. Para ello, células sanguíneas de 5 voluntarios sanos y 5 HIV-1+ fueron cultivadas por triplicado en presencia de cada extracto a una concentración final de 800µg/mL y se incubó por 16 horas a 37 ºC. Se realizó el recuento de los leucocitos y sus 4 estirpes celulares (linfocitos, neutrófilos, eosinófilos y monocitos) mediante hemograma manual y de las poblaciones de linfocitos T CD3+CD4+ y CD3+CD8+ por citometría de flujo. Se empleó el medio de cultivo RPMI como control negativo de la prueba. En las personas saludables, para las 4 estirpes celulares evaluadas, el extracto clorofórmico logró incrementar significativamente el número de linfocitos (p=0.003). La población linfocitaria T CD3+CD4+ presentó un incremento celular con el extracto clorofórmico (p= 0.004).En las personas HIV-1+, los 3 extractos lograron incrementar el número de leucocitos. En los individuos pertenecientes al estadío C se observó que el extracto clorofórmico logró un incremento significativo del número de linfocitos respecto al control. Estos resultados pueden ser de gran ayuda para utilizar a L. peruvianum Ch. en el tratamiento de personas infectadas con HIV-1 contribuyendo con restaurar el nivel y funcionamiento de las células T infectadas por el virus. Palabras Clave: Lepidium peruvianum, Lepidium meyenii, maca, inmunoestimulante, metabolitos secundarios, HIV-1, SIDA.
Detección de anticuerpos neutralizantes contra los virus Rocío, Ilheus y Oeste del Nilo en una población humana de Iquitos entre los años 2003-2007
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2009) Juárez Espinoza, Diana Stephanie; Alzamora Gonzales, Libertad
Los flavivirus se encuentran distribuidos en las principales zonas tropicales del mundo, nuestra Amazonía es endémica para virus como el dengue; sin embargo, alberga también otros virus que aún no han sido estudiados. El objetivo fue determinar la presencia de anticuerpos neutralizantes contra los virus Rocío, Ilheus y Oeste del Nilo; utilizando la técnica del ELISA como tamizaje para la detección de muestras positivas y la microneutralización como prueba confirmatoria. Se analizaron un total de 400 sueros por ELISA IgG de personas en fase convaleciente de la localidad de Iquitos entre los años 2003 y 2007. 152 sueros fueron negativos y 248 dieron positivo por ELISA IgG, de las cuales se confirmó mediante microneutralización 23 sueros positivos para el virus Ilheus y 7 sueros positivos para el virus Rocío. El valor de reacción cruzada para la prueba de ELISA fue de 87%. Los resultados indican la existencia de anticuerpos neutralizantes contra el virus Ilheus en un 5.75% de los sueros analizados y también la presencia de anticuerpos neutralizantes contra el virus Rocío en un 1.75% de los sueros, afortunadamente las infecciones por estos virus en la localidad de Iquitos no es significativa con respecto a la observada para el virus dengue (34.7%).
Detección y cuantificación de la expresión transcripcional para tres receptores tipo toll y dos citoquinas proinflamatorias en cultivos de macrófagos murinos infectados con Leishmania braziliensis nativa
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2019) Torres Gonzales, Dina; Alzamora Gonzales, Libertad
Menciona que Leishmania braziliensis es un protozoario causante de la leishmaniasis o uta, enfermedad endémica crónica de baja patogenicidad, alta morbilidad, metaxénica y zoonótica que compromete piel, mucosas y vísceras. Es transmitida por un díptero del género Lutzomyia, afecta alrededor de 12 millones de personas alrededor del mundo y a 12 departamentos en el Perú. Leishmania braziliensis tiene patrones moleculares de membrana asociadas a patógenos que son reconocidos por los receptores tipo toll (TLR) presentes en el hospedero, tanto en la superficie celular como a nivel intracelular. Los TLRs están conformados por una familia de 23 tipos que van a reconocer ligandos presentes en patógenos en común. Cuando se da la unión del ligando con un TLR desencadenará una secuencia de señales activando la expresión de moléculas coestimuladoras y citoquinas promoviendo una inflamación y activando la respuesta adaptativa. El presente trabajo tiene como objetivos caracterizar a la cepa C234 de Leishmania braziliensis mediante secuenciamiento y detectar y cuantificar los niveles de expresión de mRNA de los genes TLR-3, TLR-4 y TLR-9 y de las citoquinas IL-12 y TNF-α en macrófagos murinos enfrentados a la cepa C234 de Leishmania braziliensis, endémica del Perú. Se infectó macrófagos peritoneales de ratones Balb/c con promastigotes de Leishmania braziliensis y se cultivaron por 24 horas, se midió los niveles de óxido nítrico (ON), se extrajo mRNA de los macrófagos y se detectó y cuantificó los niveles de expresión en los genes de TLR-3, TLR- 4 y TLR-9, y de las citoquinas proinflamatorias IL-12 y TNF-α, a través de la técnica de retrotranscripción mediante la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real (RT-qPCR). Los resultados indicaron que el estudio filogenético de la cepa C234 mostró alta homología (96%) para Leishmania braziliensis. Además, los macrófagos infectados con Leishmania braziliensis presentaron mayor producción de ON sólo en las primeras horas de infección, descendiendo a las 24 y 48 horas; y se detectó expresión de mRNA para los genes TLR-3, TLR-4 y TLR-9 y de las citoquinas IL-12 y TNF-α. Se concluye que la cepa nativa C234 pertenece a la especie Leishmania braziliensis y que la disminución de la producción de ON está relacionada al mayor tiempo de infección y bajos niveles de expresión del gen TLR-4, así mismo, el incremento del nivel de expresión de mRNA de los genes TLR-3 y TLR-9 podrían estar implicados en la activación de la expresión génica de la citoquina IL-12 en macrófagos peritoneales murinos infectados con Leishmania braziliensis.
Determinación de la actividad mitogénica in vitro del extracto de lectinas de semillas de Lupinus mutabilis Sweet (TARWI) sobre poblaciones de linfocitos humanos de sangre periférica
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2015) De Amat Herbozo, Carolina Cecilia; Alzamora Gonzales, Libertad
Evalúa la capacidad mitogénica del extracto de lectinas de semillas de tarwi del ecotipo “Patón Grande” (UNALM-Otuzco, La Libertad) sobre subpoblaciones de linfocitos T humanos. Se elabora un extracto crudo y se fracciona por cromatografía de exclusión molecular para aislar las lectinas, las cuales se identifican mediante hemaglutinación y SDS-PAGE. Realiza cultivos de células mononucleares de sangre periférica empleando diferentes concentraciones del extracto y de la fracción seleccionada. En los cultivos con extracto evalúa la proliferación y la activación de linfocitos T por observación microscópica directa y determinación de receptor CD25, respectivamente. En los cultivos con la fracción seleccionada se determina el índice de estimulación, el índice mitótico y se identifican las subpoblaciones de linfocitos T mediante ensayo MTT, obtención de placas metafásicas y citometria de flujo, respectivamente. El extracto crudo y la fracción seleccionada mostraron mayor actividad hemaglutinante sobre glóbulos rojos de conejo comparado con los de carnero y humano. Determina que la fracción contenía una lectina de aproximadamente 43 KDa. Se evidencia proliferación y activación en los cultivos, obteniéndose 43.7±1.4% (p<0.01) de linfocitos T con receptor para IL-2 (CD25+) a 1 µg/mL de extracto. El máximo índice de estimulación fue de 1.22±0.07 a 5 µg/mL, mientras que el índice mitótico fue de 1.5%. El porcentaje de linfocitos CD3+ fue superior respecto al control sin lectinas (p=0.02); mientras que las subpoblaciones CD4+ y CD8+ mantuvieron las mismas proporciones que el control. Se concluye que las lectinas del ecotipo Patón Grande tienen actividad mitogénica sobre linfocitos T y estimulan indistintamente a linfocitos T CD3+/CD4+ y CD3+/CD8+.
Efecto modulador de la respuesta inmune humoral de extractos de Lepidium peruvianum Chacón (Maca) en ratones inmunosuprimidos con ciclosfosfamida
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2008) Torres Gonzales, Dina; Alzamora Gonzales, Libertad
Las raíces de Lepidium peruvianum Chacón (maca) son reconocidas por sus propiedades curativas dentro de la medicina tradicional, estas poseen metabolitos secundarios con actividad biológica como alcaloides, flavonoides y glicosinolatos que podrían estimular la recuperación del sistema inmune en animales con inmunosupresión experimental por Ciclofosfamida (CP) que induce supresión del sistema inmune humoral en ratones. El presente trabajo tuvo como objetivo comprobar el efecto modulador de la maca sobre la respuesta inmune humoral en ratones suprimidos con ciclofosfamida. Fueron obtenidos tres tipos de extractos: clorofórmico (ECl), metanólico (EMe) y acuoso (EAc) que se administraron por vía oral en dosis de 300mg/Kg del peso corporal.
Efectos hipolipémico y antioxidante de Lepidium meyenii Walp en ratas
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2008) Oré Sifuentes, María Raquel; Alzamora Gonzales, Libertad
La maca (Lepidium meyenii Walp) es una raíz de los andes del Perú, usada como alimento por su valor nutricional y sus propiedades etnomedicinales, por lo que forma parte de la medicina tradicional. Los objetivos del presente estudio fueron, demostrar la capacidad antioxidante de los extractos acuoso y etanólico de harina de maca amarilla in vitro y comprobar en animales que recibieron una dieta hipercolesterolémica el efecto antioxidante e hipolipemiante de los ecotipos amarillo, negro, rojo y morado de maca. Finalmente evaluar los efectos adversos de la administración de maca y atorvastatina en ratas hipercolesterolémicas a nivel hepático. Se realizaron pruebas para medir la capacidad antioxidante del extracto acuoso y etanólico in vitro. Se emplearon ratas machos Sprague-Dowley, sometidas a una dieta rica en colesterol y distribuidas en grupos de acuerdo al tratamiento, ya sea con los ecotipos de maca o atorvastatina, se evaluó perfil lipídico, vitamina A, C, niveles de TBARS-MDA y fibrinógeno. Los cuales fueron analizados aplicando la prueba t de Student y la Turkey. Así mismo mediante cortes histológicos se evaluó el tejido aórtico y hepático de los grupos de estudio.
Estudio comparativo de la actividad moduladora del extracto metanólico de cuatro ecotipos de Lepidium peruvianum Chacón (maca) sobre la respuesta inmune humoral y celular en ratones
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2008) Alvarez Salazar, Evelyn Katy; Alzamora Gonzales, Libertad
Lepidium peruvianum (maca), es un cultivo tradicional de los Andes Centrales del Perú y es empleada desde tiempos precolombinos como una planta medicinal y alimenticia. Los cultivares de maca se diferencian por el color externo de la raíz denominándose a cada uno como ecotipo. Estudios anteriores reportaron que los diferentes ecotipos de maca presentan diferencias en cuanto a su actividad biológica. Los objetivos del presente estudio fueron: Determinar la concentración de flavonoides, calcio y hierro en el extracto metanólico (EM) de los ecotipos blanco, morado, rojo y negro; comprobar la actividad moduladora del EM de los ecotipos blanco, morado, rojo y negro sobre la respuesta inmune humoral in vivo frente a los glóbulos rojos de carnero (GRC) en animales normales e inmunosuprimidos con ciclofosfamida (CF), así como su efecto sobre el peso y celularidad de los órganos linfoides y recuento de las células sanguíneas. Finalmente, determinar la producción de óxido nítrico (ON) por macrófagos peritoneales cultivados con el EM de los ecotipos seleccionados.
Estudio de las propiedades inmunomoduladora y antitumoral del fucoidan de Lessonia trabeculata (Villouta & Santelices, 1986)
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2022) Colona Vallejos, Erasmo Honorio; Alzamora Gonzales, Libertad
Los fucoidanos son compuestos obtenidos de algas pardas con importantes funciones bioactivas. El objetivo fue estudiar in vitro la propiedad inmunomoduladora y antitumoral del fucoidan de Lessonia trabeculata (FLt) sobre células mononucleares de sangre periférica humana (CMSPh) y líneas celulares de cáncer de cérvix (HeLa), leucemia promonocítica humana (U937). Las células fueron tratadas con diferentes concentraciones de FLt (PSW S.A.), fucoidan comercial de Fucus vesiculosus (FFv, control fucoidan) y Doxorrubicina (Dox, control de citotoxicidad). La viabilidad de las CMSPh se evaluó por el ensayo del MTT (48 h), mientras que la síntesis de especies reactivas de nitrógeno (NO, 24-48 h) y oxígeno (ROS, 24-48 h) se detectaron por la reacción de Griess y NBT respectivamente. La expresión génica de las citoquinas proinflamatorias IL-1α, IL-6, TNF-α e IFN-Ȗ se determinó por ELISA y PCR convencional. Se determinó la actividad antitumoral y apoptótica en las líneas HeLa y U937 y Vero 76 (control) por el ensayo MTT y Anexina V/Muerte celular (72 h). El ensayo de inhibición de la migración celular se realizó en línea HeLa. Como control positivo se utilizaron FFv (control fucoidan) y doxorrubicina HCl (control citotoxicidad) y como control negativo células en medio RPMI completo. El FLt incrementó la proliferación de CMSPh (p<0.01) y ROS (p<0.0001). No se detectó el NO. El fucoidan aumentó la expresión génica de la IL-1α y TNF-α, mientras que para la IL-6 e IFN-Ȗ no se observó diferencias significativas. El FLt indujo potentes efectos antitumorales y apoptóticos en las líneas HeLa y U937 (p<0.0001), y antimigratorios en la línea HeLa (p<0.0001). Se concluye que el FLt presenta actividad mitogénica en CMSPh e incrementa la ROS, IL-1α y el TNF-α. Además, induce la apoptosis selectiva en HeLa y U937 e inhibe la migración de HeLa. El FLt presenta promisorias propiedades inmunomoduladoras y antitumorales.
Estudio del efecto del fucoidan de Lessonia trabeculata nativa (alga parda) sobre la capacidad migratoria y clonogénica de la línea celular de carcinoma mamario murino 4T1
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2020) Toccas Salas, Mary Luz; Alzamora Gonzales, Libertad
El fucoidan es un polisacárido sulfatado presente en las algas pardas, cuya estructura y composición varía entre las diferentes especies de algas y se ha demostrado que posee efectos anticancerígenos, entre otros. El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto del fucoidan de Lessonia trabeculata (FLt) sobre la capacidad migratoria y clonogénica de la línea celular de carcinoma mamario murino 4T1. Se determinó la citotoxicidad de FLt mediante el ensayo MTT; se calculó la IC50 (concentración que inhibe el 50% de la población) y el índice de selectividad (IS). Como controles de actividad se consideraron el estándar de fucoidan de Fucus vesiculosus (FFv) y el quimioterápico doxorrubicina (Dox). Las células VERO-76 fueron empleadas como control de células normales. Se realizó el ensayo de migración celular por el método de “cierre de herida” y el ensayo clonogénico considerando 3 concentraciones de FLt, seleccionadas a partir de su IC50. Los resultados muestran que el FLt redujo la viabilidad celular de 4T1, con una IC50 de 950 µg/mL, y ejerció menor toxicidad sobre VERO-76, demostrando toxicidad selectiva sobre 4T1 (IS= 3.15). El FFv ejerció menor efecto citotóxico sobre ambas líneas celulares. El FLt inhibió significativamente y de manera dosis-dependiente la migración celular y la capacidad clonogénica o formación de colonias de 4T1 en concentraciones de 700, 950 (IC50) y 1200 µg/mL respecto al control no tratado (p<0.0001) a las 12 y 24 h de exposición. Adicionalmente se consideró el tratamiento combinado [Dox + FLt] IC50, demostrándose que el FLt IC50 incrementa la efectividad de doxorrubicina sobre 4T1. Se concluye que el FLt tiene el potencial de inhibir la proliferación, migración y capacidad clonogénica de 4T1 in vitro de manera selectiva y dosis-dependiente.
Estudio in vivo de la actividad moduladora del fucoidan de Lessonia trabeculata Villouta & Santelices (1986) sobre parámetros de la inmunidad innata y humoral
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2019) Oroya Lazo, Carlos Andrés; Alzamora Gonzales, Libertad
Evalúa el efecto inmunomodulador del fucoidan de Lessonia trabeculata en un modelo murino. Se trataron ratones por vía oral con fucoidan de L.trabeculata y se inmunizaron con glóbulos rojos de carnero (GRC). Un grupo de ratones recibió una dosis de 5 y otro, de 10 mg/kg p.c. Se emplearon 2 grupos controles: uno fue tratado con fucoidan de Fucus vesiculosus a la dosis de 5 mg/kg p.c. y otro, con solución salina (0.9%). En los 4 grupos se evaluó tanto la respuesta inmune primaria, como la secundaria. Concluidos los tratamientos se extrajeron los macrófagos peritoneales para evaluar parámetros de la inmunidad innata; Especies reactivas de oxígeno (ERO), especies reactivas de nitrógeno (ERN) y fagocitosis; y parámetros de la inmunidad humoral: presencia de anticuerpos hemaglutinantes (IgM) y opsonizantes (IgG). Los resultados obtenidos para los citados parámetros fueron contrastados con la presencia de mRNA transcripcional para IL-4, IL-5, IL-6 e IL-10 en esplenocitos. Adicionalmente se determinó la presencia de IL-10 sérico por ELISA. Los resultados indican que el fucoidan puede aumentar la producción de ERO en la respuesta inmune primaria (RIP), no detectándose diferencias en la respuesta inmune secundaria (RIS). La producción de ERN aumentó de forma dosis dependiente en la RIP y RIS. La fagocitosis mediada por anticuerpos en la RIS aumentó significativamente solo en el grupo tratado con fucoidan de L. trabeculata con dosis 10 mg/kg p.c. También se observó que la expresión transcripcional de IL-4, IL-5, IL-6 e IL-10 por esplenocitos fue modulada y dependiente del tratamiento, dosis y tipo de respuesta inmune. En contraste, no se encontraron diferencias estadísticamente significativas entre L.trabeculata y F.vesiculosus, y dosis en la producción de hemaglutininas anti-GRC, ni en la concentración de IL-10 en suero. Se concluye que el tratamiento con fucoidan de L. trabeculata por vía oral en ratones inmunizados posee capacidad de estimular diferentes parámetros inmunes como la producción de ERO y ERN, fagocitosis mediada por anticuerpos y expresión transcripcional de IL-4, IL-5, IL-6 e IL-10.
Evaluación de la actividad inmunomoduladora y leishmanicida de extractos y fracciones de lectinas de semillas de dos ecotipos de Lupinus mutabilis sweet (fabaceae)
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2016) Chauca Torres, Nadia Emely; Alzamora Gonzales, Libertad
Evalúa la actividad leishmanicida e inmunomoduladora de las lectinas presentes en extractos y fracciones de dos ecotipos Patón Grande (PG) y Compuesto Blanco Semiprecoz (SP) de Lupinus mutabilis. Para determinarla se aplica la cuantificación de no producido por los macrófagos tratados antes y después de la infección y por el cálculo del índice fagocítico.
Evaluación de los efectos de la quitina en la respuesta inmune humoral y celular innata de especímenes juveniles Oncorhynchus mykiss desafiados con la cepa estándar Flavobacterium psychrophilum NMCD 1947T
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2010) Hurtado Lévano, Pablo César; Alzamora Gonzales, Libertad
La acuicultura es una de las áreas de mayor prioridad para el desarrollo de nuestro país, sin embargo, existen muchos aspectos en los cuales no se ha investigado y otros en los que se está iniciando, como es el caso del uso de inmunoestimulantes para lograr mejores resultados en la producción de algunas especies de importancia económica. Uno de los inmunoestimulantes investigados en peces dulceacuícolas es la quitina, que administrada como suplemento dietético potencia la respuesta inmune previniéndoles del ataque de agentes patógenos como Flavobacterium psychrophilum. El objetivo de la investigación fue evaluar la actividad inmunoestimulante de la quitina, administrada por vía oral a juveniles de trucha arco iris (Oncorhynchus mykiss) en condiciones de inmunocompetencia e inmunosupresión y posteriormente desafiados con la cepa estándar F. psychrophilum 1947T causante de la “enfermedad del agua fría”. Para demostrar los efectos de la quitina se evaluaron parámetros de la inmunidad innata celular (actividad fagocitaria y producción de óxido nítrico) y humoral (complemento por vía alternativa y lisozima sérica). Además, se determinó el tiempo necesario de tratamiento con quitina para lograr una adecuada inmunoestimulación. Las truchas fueron alimentadas con pienso suplementado con quitina y sin ella (n=20 en cada caso) durante 2 y 4 semanas. La quitina se incorporó a la dosis de 100g/Kg de alimento, el mismo que fue suministrado a la proporción del 1% de la biomasa. Luego del tratamiento los dos grupos fueron inmunosuprimidos con ciclofosfamida y desafiados por vía intramuscular. Se concluye que existe una mejora significativa en la producción de óxido nítrico y la actividad de lisozima sérica de los peces inmunosuprimidos y tratados con quitina en comparación con los peces inmunocompetentes y los no tratados. El complemento por vía alternativa y la actividad fagocitaria in vitro no mostraron variaciones significativas para ambos grupos desde las dos semanas de tratamiento.
Evaluación del efecto inmunomodulador del fucoidan VITALG® de Lessonia trabeculata nativa sobre la producción de inmunocitoquinas por esplenocitos en dos tipos de tratamiento para carcinoma mamario 4T1
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2022) Condori Macuri, Rosa María; Alzamora Gonzales, Libertad
El fucoidan de algas pardas es un polisacárido sulfatado con amplia variedad de actividades biológicas, entre ellas la modulación de la respuesta inmunitaria a través de la producción o inhibición de citoquinas, por lo cual, su uso en la terapia combinada con quimioterápicos convencionales contra distintos tipos de cáncer ha sido postulado en diversos estudios. El objetivo fue demostrar la inmunomodulación producida por el fucoidan VITALG® de L. trabeculata (FLt) sobre heteroesferoides sometidos a tratamiento combinado (doxorrubicina + fucoidan) y tratamiento simple (solo fucoidan), verificado mediante la producción de citoquinas. Ambos tratamientos fueron planteados en base a las IC50 de FLt y doxorrubicina (control positivo), los cuales se hallaron mediante el ensayo MTT, utilizando homoesferoides de células 4T1. Los heteroesferoides estuvieron compuestos de células 4T1 y esplenocitos BALB/c, se determinó el número y proporción de células necesarios para su formación, y las citoquinas se identificaron a partir de sus sobrenadantes, mediante ensayos de ELISA. Los valores de IC50 para FLt y doxorrubicina fueron 428 μg/mL y 2 μg/mL, respectivamente. Además, se observó la deformación de los homoesferoides como consecuencia de la acción citotóxica de los tratamientos. La estandarización de los heteroesferoides 4T1:esplenocitos se consiguió con 1x104 células totales, en una proporción de 10:1. Los tratamientos probados incrementaron TNF-α e IL-6, y redujeron IL-10 y TGF-β, lo que indica la promoción de la respuesta proinflamatoria con la consecuente inhibición de la antiinflamatoria. No se reportó incremento de IFN-γ, IL-2, IL-4 e IL-5. Se concluye que el fucoidan VITALG® de L. trabeculata, en tratamiento combinado o simple, promueve la producción de citoquinas de inmunidad celular.
Evaluación in vitro del efecto inmunomodulador del extracto metanólico del ecotipo morado de Lepidium meyenii, Walpers sobre la expresión génica y secreción de TNF-α por células mononucleares de sangre periférica humana
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2018) Huayhua Rodriguez, Julio Kevin; Alzamora Gonzales, Libertad
Lepidium meyenii, Walpers, conocido mundialmente como “maca”, es un tubérculo nativo de los Andes del Perú, que vive en regiones a más de 4000 msnm. Es reconocida mundialmente y ha sido objeto de numerosos estudios por muchas propiedades terapeúticas, afrosidiacas, entre otras que se le atribuyen; siendo alguna de estas ya verificadas científicamente. Su participación como inmunomodulador también ha sido estudiada, llegándose a encontrar efectos protectores, anticancerígenos; sin embargo, aún existe controversia sobre su participación en procesos inflamatorios. Es por eso que el objetivo de la presente investigación fue verificar su efecto sobre la producción de mRNA y secreción de TNF-α, una citoquina clave en los procesos inflamatorios, además de otros intermediarios como óxido nítrico (NO) y anión superóxido en células mononucleares de sangre periférica humana. Para esto se preparó un extracto metanólico (EM), partiendo de harina de hipocótilo deshidratado del ecotipo morado de maca. Se realizaron pruebas de viabilidad, a través de la reducción del MTT. El óxido nítrico fue medido utilizando la reacción de Peter Griess, mientras que el “estallido respiratorio” fue cuantificado a partir de la reducción del nitroblue tetrazolio (NBT). La expresión génica y secreción de TNF-α fueron evaluadas por un análisis cualicuantitativo a partir de PCR convencional, y ELISA tipo sándwich, respectivamente. Los resultados mostraron que el EM no afectó la viabilidad celular, ni estimuló significativamente la producción del anión superóxido. Sin embargo, se demostró un aumento dosis-dependiente de la producción de NO y TNF-α. Los hallazgos sugieren que los metabolitos secundarios que contiene el EM estimulan la respuesta inmune innata celular, siendo necesarias futuras investigaciones que complementen estos hallazgos.
Expresión de citoquinas proinflamatorias por monocitos humanos infectados con dos especies de Leishmania en presencia de lectinas hemaglutinantes del ecotipo patón grande de Lupinus mutabilis sweet (Tarwi)
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2017) Arone Farfán, Ricardo; Alzamora Gonzales, Libertad
Determina el efecto de las lectinas hemaglutinantes de Lupinus mutabilis (tarwi) en la activación y expresión de citoquinas proinflamatorias en monocitos humanos infectados con Leishmania peruviana y Leishmania braziliensis. Se procedió a purificar las lectinas del extracto de semillas de L. mutabilis mediante dos métodos cromatográficos: exclusión molecular seguido de intercambio aniónico. Para el aislamiento de monocitos humanos de sangre periférica se diseñó y aplicó un método de separación seriada empleando dos polímeros de distintas densidades. El cultivo de monocitos fue tratado con diferentes dosis de fracción de lectinas hemaglutinantes (FrPG) obtenidas por cromatografía de exclusión molecular y lectina purificada (LP) obtenida por cromatografía de intercambio aniónico. Se evaluó la viabilidad celular, producción de anión superóxido y liberación de óxido nítrico. Las concentraciones óptimas de FrPG y LP fueron probadas en cultivos de monocitos humanos infectados con L. peruviana y L. braziliensis, en los que se evaluó la expresión de citoquinas proinflamatorias. Las concentraciones de 50, 75 µg/ml de FrPG y 20 µg/ml de LP produjeron el incremento significativo de la producción de anión superóxido en cultivo de monocitos no infectados. La producción de anión superóxido en monocitos previamente tratados e infectados con L. peruviana fue significativa con 75 µg/ml de FrPG y 20 µg/ml de LP, mientras que en monocitos infectados con L. braziliensis solo se presentó con 20 µg/ml de LP. No se produjo liberación de óxido nítrico en ninguna de las concentraciones de FrPG y LP en los cultivos de monocitos no infectados o infectados con las especies de Leishmania evaluadas. Se incrementó la expresión génica de mRNA para IL-1α y TNF-α solo en los cultivos de monocitos infectados con L. peruviana en presencia de LP a 20 µg/ml. Se concluye que el tratamiento con lectina purificada de tarwi induce la producción de anión superóxido en monocitos no infectados e infectados con L. peruviana y L. braziliensis y favorecen el incremento de la expresión de citoquinas proinflamatorias solo en monocitos infectados con L. peruviana.
Expresión de inmunocitoquinas e inmunofenotipificación de células mononucleares de sangre periférica humana tratadas con la lectina de Lupinus mutabilis Sweet (Tarwi), ecotipo Patón Grande
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2017) Colona Vallejos, Erasmo Honorio; Alzamora Gonzales, Libertad
Determina la expresión génica transcripcional de inmunocitoquinas y el inmunofenotipo de las células mononucleares de sangre periférica humana (CMSPh) tratadas con la lectina semipurificada de Lupinus mutabilis Sweet, ecotipo Patón Grande. El extracto proteico (EPG) elaborado a partir de la harina desengrasada de semillas de lupino se fraccionó mediante cromatografía de exclusión molecular. Las lectinas del extracto y fracciones se identificaron mediante la actividad hemaglutinante y SDS-PAGE. Las CMSPh se incubaron durante 24 y 72 h con el EPG (5 μg/mL), la fracción 9 del pico I (F9-PI 5 y 25 μg/mL), fitohemaglutinina (PHA, control positivo) y medio RPMI (control negativo). La expresión génica de las inmunocitoquinas e inmunofenotipificación se realizó mediante la PCR convencional y citometría de flujo respectivamente. El EPG y la F9-PI a la concentración de 5 μg/mL durante 24 y 72 h de incubación estimularon la expresión de IL-1α y TNF-α mRNA con respecto al control. Sin embargo, la fracción F9- PI (25μg/mL) a las 72 h de incubación aumentó significativamente la expresión de IL-10. Las CMSPh tratadas con el EPG y la F9-PI a la concentración de 5 μg/mL durante 72 h no incrementaron el recuento total de linfocitos y monocitos, mientras que la F9-PI (25 μg/mL) aumentó significativamente el número total de monocitos con respecto a los controles. Se concluye que el EPG y la F9-PI estimulan la expresión de IL-1α y TFN-α mRNA, mientras que la lectina semipurificada a la concentración de 25 μg/mL eleva la expresión de IL-10 mRNA e induce el incremento del número total de monocitos CD4+CD16-.
Identificación de apoptosis en células THP-1 Y LLC-MK2 inducida por antígenos de dos cepas de Trypanosoma cruzi
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2015) Paico Montero, Henry Alonso; Alzamora Gonzales, Libertad; Verástegui Pimentel, Manuela Reneé
Evalúa la calidad microbiológica de aguas subterráneas (pozos), utilizadas para el consumo humano ubicadas en el Centro Poblado de Santa María de Huachipa en el distrito de Lurigancho, Lima. Se recolectaron treinta y cuatro muestras de aguas subterráneas (pozos). Para la determinación de Coliformes Totales, Escherichia coli, y Enterococcus sp., el análisis es realizado con la técnica del Número Más Probable (NMP), para bacterias heterotróficas y Pseudomonas aeruginosa, se emplean los métodos de recuento en placa y filtración de membrana respectivamente. En los resultados se observan valores superiores a los límites establecidos por el MINAM-2008, DIGESA y Código Alimentario Argentino, encontrándose que el 74% (25) de las muestras de agua supera el parámetro de bacterias heterotróficas (máximo 500 UFC/mL), el 100% (34) de las muestras de agua no cumple con el parámetro para coliformes totales (< 1,8 NMP/100mL o ausencia), y el 53% (18) de las muestras de agua supera los límites establecidos para Escherichia coli (< 1,8 NMP/100mL o ausencia). En el caso de Enterococcus sp. (< 1,8 NMP/100mL o ausencia) el 85% (29) de las muestras de agua supera el límite permisible; y el 53% (18) de las muestras presentó Pseudomonas aeruginosa (< 1 UFC/100mL o ausencia). Se concluye que ninguna muestra de agua cumple con los requisitos microbiológicos para ser aceptable como aguas de consumo humano, constituyendo un riesgo potencial para la salud de los consumidores debido a los elevados niveles de contaminación microbiana.
Identificación de mutaciones heredadas y de novo en el gen BTK de una cohorte de pacientes con agammaglobulinemia primaria en el Instituto Nacional de Salud del Niño
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2021) Matos Benavides, Edgar Emilio; Alzamora Gonzales, Libertad
Las agammaglobulinemias primarias (AP) son las enfermedades que resultan de la alteración en la producción de anticuerpos. El diagnóstico se confirma con estudios moleculares que buscan identificar una mutación. en los genes responsables del proceso. Se ha descrito que existe influencia de los factores genéticos en la supervivencia de los pacientes. Se realizó un estudio de cohorte dinámica retrospectiva en los pacientes registrados en una base de datos de inmunodeficiencias primarias. Para el secuenciamiento se usó el método NIRCA. Los resultados obtenidos por este método fueron verificados mediante secuenciación directa utilizando el kit de secuenciación de productos T7 PCR, Sequenase 2.0. Para el análisis de supervivencia se elaboró una curva de Kaplan Meier siendo el evento final la mortalidad y se comparó la supervivencia en base al genotipo. Se encontraron 20 pacientes con mutaciones en el gen BTK con13 mutaciones heredadas y 7mutaciones de novo de los cuales 4/20 (20 %) fallecieron durante el seguimiento. El tiempo de supervivencia global para mutaciones BTK fue de 145,8 meses. Al comparar las curvas de supervivencia con el análisis de Kaplan Meier no se encontró diferencia significativa entre las curvas de supervivencia de los pacientes con mutación BTK heredada versus de novo (p=0,62). Se concluye que no existe diferencia significativa entre la sobrevida de pacientes con mutaciones heredadas y de novo.

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