Síntesis de nanoanticuerpos recombinantes de alpacas con capacidad de unión a la proteína S1 de SARS-CoV-2 mediante Bacterial Display

Abstract

La pandemia causada por el coronavirus SARS-CoV-2 tuvo un profundo impacto en la población mundial, poniendo en evidencia la necesidad de contar con técnicas diagnósticas y protocolos terapéuticos eficaces. Este contexto resalta la importancia de fomentar la investigación y el desarrollo continuo de tecnologías innovadoras que fortalezcan la capacidad de respuesta ante emergencias sanitarias y contribuyan a una mejor preparación frente a futuras pandemias. Los nanoanticuerpos (VHH) de alpaca han sido erigidos como una tecnología bastante promisoria tanto para el desarrollo de terapias como de técnicas diagnósticas. El presente estudio tuvo como finalidad el desarrollo de un protocolo que permita obtener VHH recombinantes de alpaca con capacidad de unión a la proteína S1 del virus SARS-CoV-2. Para ello, una alpaca macho adulta, de 3 años, aparentemente sano, fue inmunizado tres veces con proteína recombinante correspondiente al dominio S1 de la proteína Spike de SARS-CoV- 2. Posteriormente, se obtuvieron células mononucleares de sangre periférica (PBMC), a partir de las cuales se llevó a cabo la extracción del ARN total y posterior retrotranscripción a ADNc. Seguidamente, se realizó una PCR anidada con el propósito de amplificar la región correspondiente a la secuencia codificante de VHH. Se utilizó la técnica Bacterial display para la expresión de los nanoanticuerpos en la membrana celular de bacterias Escherichia coli a partir de las secuencias codificantes obtenidas previamente. La evaluación de la afinidad de los nanoanticuerpos con capacidad de ligación a la proteína S1 de SARS-CoV-2 se realizó mediante la prueba de ELISA indirecto. Se pudo identificar de forma preliminar cuatro secuencias de nanoanticuerpos a partir de una librería de 54 E. coli recombinantes obtenido del análisis del 11% del ARN total extraído de las PBMC. El secuenciamiento de los insertos confirmó que correspondían a secuencias de VHH. Los resultados obtenidos en este estudio pueden ser usados como base en investigaciones sobre terapias y para el desarrollo de pruebas diagnósticas.