Comparación del efecto de metilformamida y glicerol al 1%, 3.5% y 7% en la criopreservación de espermatozoides epididimarios de alpaca

Abstract

El glicerol ha sido muy usado dentro de los protocolos de crioperservación de esperma de diferentes animales, sin embargo, debido a algunos efectos nocivos que se pueden presentar a lo largo de los últimos años se han ido experimentando crioprotectores alternativos para algunos animales. En los camélidos sudaméricanos existen pocos estudios acerca del uso de la metilformamida como agente crioprotector. El objetivo de este trabajo fue comparar el efecto del glicerol y de metilformamida en las concentraciones de 1%, 3,5% y 7% respectivamente, sobre los parámetros de motilidad, viabilidad espermática y potencial de membrana mitocondrial. Se obtuvieron los espermatozoides epididimarios de 40 muestras de testículos individuales y se empleó un dilutor hecho a base de leche descremada, fructosa y yema de huevo. Para la evaluación de la calidad seminal se analizó la motilidad progresiva y la concentración espermática mediante microscopía óptica y se utilizaron aquellas muestras cuya motilidad progresiva fue igual o mayor a 30% y cuya concentración fue igual o mayor a 50x106 espermatozoides/ml. Se dividió cada muestra resuspendida en 6 alicuotas donde se probaron las concentraciones de 1%, 3,5% y 7% de cada crioprotector. Se empajilló y se llevaron las muestras a la criocámara CL 5500 de Cryologic luego se colocaron las pajillas en el tanque de nitrogeno líquido. Posterior al descongelamiento se analizó la motilidad por microscopía asi como la viabilidad espermática y el alto potencial de membrana mitocondrial mediante citometría de flujo para lo cual se utilizaron los fluorocromos Ioduro de Propidio, SYBR-14 y MitoTracker Deep Red FM. Para el análisis de resultados se empleó el analisis de varianza y la prueba de Tukey. Los resultados mostraron que la concentración de 3.5% obtuvo una diferencia significativa con respecto a la concentración de 7% en los tres paramétros analizados.