Neurotoxicidad y muerte celular en células SH-SY5Y producidas por la exposición del insecticida piretroide flumetrin

Abstract

Evaluá el efecto neurotóxico y la alteración en la expresión de genes de muerte celular, Bax, Bcl-2 y casp-3, por exposición al insecticida piretroide flumetrín en células del neuroblastoma SH-SY5Y. Los ensayos de viabilidad celular por reducción del MTT y expresiones de genes de muerte celular por RT-PCR se realizaron en el Laboratorio de Fisiología Animal de la Facultad de Medicina Veterinaria de la UNMSM. Para el ensayo de viabilidad celular, las células SH-SY5Y, fueron sembradas en placas de 96 pocillos a una densidad de 8x10⁴ cel/pocillo y se incubaron durante 24 h con flumetrín en diferentes concentraciones (50, 100, 200, 500 y 1000 ¼M), luego se adicionó 150µL de DMSO al 5% (v/v) se dejó incubar por 5 min y se llevó al lector de ELISA a absorbancia a 540 nm. Para el ensayo de expresión de genes de muerte celular, las células SH-SY5Y, fueron incubadas por 24 h con flumetrín a diferentes concentraciones (20, 50 y 500 ¼M), se obtuvo el ARN usando el reactivo TRIzol y se purificó mediante el kit comercial de limpieza RNeasy MinElute y fueron corridas en RTPCR, usando el master mix RT2 SYBR Green qPCR. Los resultados de viabilidad celular determinaron la reducción en una forma dosis-dependiente (15 %, 22 %, 41 %, 43 % y 47 %, respectivamente); logarítmicamente se predijo la IC50 para flumetrín siendo 104 µM. Los resultados de la expresión de genes de muerte celular determinaron respectivamente un aumento significativo de la expresión de casp-3 en 1,34 (P < 0.05), 2,1 y 2,7 (P < 0.001) veces respecto al vehículo. Los niveles de Bax aumentaron respectivamente en 1,8 y 2.5 (P < 0.001) veces respecto al vehículo. La expresión de Bcl- 2 no mostró cambios significativos en su expresión. El ratio muerte/sobrevivencia celular determinado por la relación Bax/Bcl-2, y se encontró que la susceptibilidad de sufrir muerte celular debido a la dosis tiene un correlación muy alta (r = 0.99). Con este estudio se evidencia el efecto neurotóxico del flumetrín en células SH-SY5Y, además se sugiere continuar con los estudios de este piretroide.