Comparación entre el método tradicional y la tinción azul brillante de cresilo para la selección de complejos cúmulo ovocitos (COCs) competentes, obtenidos por aspiración folicular (OPU) en alpacas (Vicugna pacos)

Abstract

La producción in vitro de embriones (PIV) en alpacas se ve limitada por la escasa disponibilidad de ovocitos de alta calidad, los cuales suelen obtenerse de ovarios procedentes de mataderos. En este contexto, resulta fundamental optimizar tanto la recuperación como la selección ovocitaria. El presente estudio tuvo como objetivo comparar el método tradicional de selección basado en criterios morfológicos con la tinción azul brillante de cresilo (BCB) para seleccionar complejos cúmulo ovocitos (COCs) con mayor competencia de desarrollo. Alpacas no gestantes (6–8 años) fueron sometidas a ablación folicular para eliminar folículos ≥ 4 mm, seguida de estimulación ovárica hormonal. Los COCs se recuperaron mediante aspiración folicular transvaginal guiada por ultrasonografía (OPU), utilizando un ecógrafo ExaPad Mini y una bomba de vacío calibrada a 55 mmHg. Posteriormente, los COCs fueron clasificados morfológicamente en cuatro categorías (MT) y luego teñidos con BCB (26 μM, 38.5 °C, 5 % CO₂, 90 min). Se consideraron seleccionables los COCs de grados 1 y 2 por MT, y aquellos con citoplasma teñido de azul (BCB+). De 253 folículos aspirados, se recuperaron 113 COCs (44.7 %). Según el MT, el 62.0 % fueron seleccionables (G1+G2), mientras que el método BCB identificó como seleccionables al 78.8 % (BCB+), con diferencia estadísticamente significativa (Chi-cuadrado, p < 0.05). La proporción de BCB+ según el grado morfológico fue: G1 (97.1 %), G2 (85.7 %), G3 (60.7 %) y G4 (53.3 %). Tras la maduración in vitro, el 90.0 % de los BCB+ y solo el 30.0 % de los BCB– alcanzaron la maduración nuclear (Chi-cuadrado, p < 0.05). Estos resultados sugieren que COCs morfológicamente descartados por el MT, pueden tener potencial de desarrollo. Se concluye que la tinción BCB es un método más objetivo que el método tradicional para seleccionar COCs competentes en alpacas, y su aplicación podría mejorar el éxito de los programas de PIV en esta especie.