Efecto citotóxico y proapoptótico in vitro del Fucoidan de Lessonia trabeculata Villouta & Santelices (Lessoniaceae) sobre células de carcinoma mamario murino 4T1

Abstract

El objetivo del estudio fue evaluar el efecto citotóxico y proapoptótico in vitro del fucoidan de Lessonia trabeculata nativa sobre las células de carcinoma mamario murino 4T1. Se evaluó la citotoxicidad del fucoidan de Lessonia trabeculata (FLt) sobre las células 4T1 mediante el ensayo de reducción del bromuro de 3(4,5 dimetil-2-tiazoil)-2,5-difeniltetrazólico (MTT), obteniendo la concentración media inhibitoria (IC50) y el índice de selectividad (IS). Como control de citotoxicidad se usó doxorrubicina (Dox) y como control negativo células no tratadas (CN). Las células VERO-76 se utilizaron como control de células normales. Los cultivos 4T1 se sometieron a tratamiento simple (TS, IC50FLt o IC25FLt) y tratamiento combinado (TC, IC50[FLt+Dox], IC25FLt+IC50Dox o IC25[FLt+Dox]). La expresión transcripcional de los genes antiapoptóticos (Bcl-2 y XIAP) y proapoptóticos (Casp8, Casp9 y AIF) se analizó mediante PCR convencional. La apoptosis se determinó mediante el ensayo de Anexina V, la activación de las caspasas 3/7 y la fragmentación del DNA. Los resultados muestran que existe citotoxicidad del FLt en las células 4T1 con un IC50 de 561 μg/mL, y con reducida toxicidad de las células VERO-76, demostrando selectividad sobre 4T1 (IS = 12,2). Los TS y IC50[FLt+Dox] inhibieron o redujeron la expresión transcripcional de los genes antiapoptóticos Bcl-2 y XIAP respecto al CN (p<0,0001), mientras que indujeron la expresión transcripcional de Casp8 y Casp9 con relación al CN (p<0,01). Los TS y TC incrementaron la expresión AIF mRNA con respecto al CN (p<0,0001). La IC50FLt, IC25FLt e IC50[FLt+Dox] produjo mayor porcentaje apoptótico con relación al CN (p<0,0001), mientras que todos los tratamientos incrementaron el porcentaje de activación de caspasa3/7 con respecto al CN (p<0,0001). La IC50FLt e IC50[FLt+Dox] produjo mayor ruptura del DNA, sugiriendo la muerte necrótica en células 4T1 con relación al CN. En conclusión, el FLt solo o en combinación con Dox indujo la apoptosis dependiente e independiente de caspasas sobre las células 4T1. Aunque se necesitan estudios adicionales que complementen su potencial efecto antitumoral mediado por diferentes vías de muerte celular involucradas, el FLt se consolida como una alternativa terapéutica contra el cáncer de mama.