Evaluación del efecto de la fracción clorofórmica de Dracontium spruceanum sobre marcadores asociados a la tumorigénesis, quimioresistencia y metástasis de células madre del cáncer gástrico de las líneas celulares AGS y KATO III

Abstract

Evalúa el efecto de una fracción clorofórmica del extracto metanólico del bulbo de Dracontium spruceanum (DSBCl) sobre células madre del cáncer gástrico aisladas de las líneas celulares AGS y KATO III, por lo cual primeramente se elaboró un extracto metanólico del bulbo de Dracontium spruceanum, que fue analizado por cromatografía en capa fina, y a partir de este se obtuvo la fracción clorofórmica. Luego se cultivaron dos líneas celulares de cáncer gástrico, AGS y KATO III, las que corresponden a un cáncer primario y metastásico, respectivamente. Usando como referencia el marcador de células madre del cáncer, CD44, se aisló una subpoblación CD44+ de cada línea celular, las cuales fueron caracterizadas por citometría de flujo y su tumorigénicidad fue evaluada a nivel in vitro. Posteriormente, estas células fueron enfrentadas con diferentes concentraciones de la fracción clorofórmica del extracto metanólico del bulbo de Dracontium spruceanum (DSBCl) para evaluar la toxicidad de esta fracción y así determinar la concentración inhibitoria media del crecimiento celular (IC50). Una vez obtenido este valor, se evaluó su efecto sobre la expresión de marcadores de superficie de células madre del cáncer por citometría de flujo y en la expresión de genes relacionados con la tumorigénesis, quimioresistencia y metástasis. Las células madre del cáncer (CSC) gástrico aisladas de la línea celular AGS se caracterizaron por expresar en la superficie de membrana los marcadores CD24, CD44, CD133, CD166, EpCAM y LGR5 en porcentajes de 13.6, 99.4, 6.21, 83.6, 99.3 y 5.78 % respectivamente, y las CSC aisladas de la línea celular KATO III se caracterizaron expresaron los marcadores CD24, CD44, CD133 y EpCAM en porcentajes de 5.62, 73.20, 43.48 y 74.22 % respectivamente. La fracción de DSBCl mostró tener efecto citotóxico en CSC de la línea celular AGS con un IC50 de 43.23 y 34.09 μg/mL para las 24 y 48 horas exposición, respectivamente; y también fue citotóxico en CSC de la línea celular KATO III para las 48 horas de exposición con un IC50 de 148.5 μg/mL. A nivel del inmunofenotipo, el IC50 de DSBCl disminuyó la expresión del CD24 en la superficie de membrana celular y también tuvo un efecto en la expresión génica disminuyendo significativamente la expresión de los genes ID1, BCL2L2, ABCC2, NANOG y OCT4, y estimulando la expresión de los genes KLF17, BAX y KLF4 en las CSC de la línea celular AGS (CSC de AGS). Por otro lado, el IC50 de DSBCl estimuló la expresión de los genes ID1 y MYC, pero redujo la expresión de los genes BCL2L1 y BAX en las CSC de la línea celular KATO III (CSC de KATO III). En conclusión, la concentración inhibitoria media (IC50) de la fracción clorofórmica de Dracontium spruceanum tiene efecto en la regulación de la expresión de los marcadores asociados a la tumorigénesis, quimioresistencia y metástasis de Células Madre del Cáncer Gástrico de las líneas celulares AGS y KATO III.