Caracterización molecular y funcional de la metaloproteasa tipo III del veneno de la serpiente Bothrops pictus (Serpentes: Viperidae)

Abstract

Bothrops pictus es una serpiente que habita la costa central peruana, en cuyo veneno se puede encontrar proteínas como las metaloproteasas I y III. Para el estudio de Pictolisina III, se extrajo veneno de 4 especímenes mantenidos en el serpentario Oswaldo Meneses -UNMS M. S e realizó la extracción de mR NA utilizando TR Izol,se empleó el Kit OneS criptc DNA S ynthesis para obtener cDNA y se realizó la amplificación del gen de Pictolisina-III mediante el uso de primers previamente diseñ ados. E l análisis molecular obtenido mediante el uso de programas bioinformáticos mostró que la secuencia del cDNA de Pictolisina III es de 2295 pb y codifica para una proteína de 610 aa, los cuales conservan un predominio y 3 dominios estructurales: Metaloproteasa, tipo desintegrina y rica en cisteína. S e purificó Pictolisina-III mediante 3 pasos cromatográficos: primero, mediante cromatografía de exclusión molecular en una columna de S ephacryl S -200; segundo, cromatografía de intercambio aniónico utilizando una columna DE AE A-50 con gradiente salina de 0.0 a 0.6 M y finalmente, cromatografía de exclusión molecular con una columna de S ephadex G-100. La pureza de la enzima fue verificada utilizando C romatografía de presión media empleando una columna E Nrich Q S E C 70. La enzima fue purificada 11.53 veces con un rendimiento del 3.85% y mediante un S DS -PAGE se obtuvo una sola banda proteica de 62 kDa en condiciones no reductoras. C on la proteína purificada se realizaron ensayos bioquímicos y se determinó que esta fue termoestable hasta los 55 ºC y presentó un pH óptimo de 7.5.