EP Microbiología y Parasitología

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Caracterización molecular de los genes asociados a la resistencia antimicrobiana en Bartonella bacilliformis
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2009) Quispe Gaspar, Ruth Liliám; García de la Guarda, Ruth Hortensia
Bartonella bacilliformis es el agente causal de la enfermedad de Carrión. Actualmente, en el Perú los casos se siguen presentando y se ha reportado fallas en el tratamiento. Hay muy pocas investigaciones acerca de la susceptibilidad a antimicrobianos, y no se tiene estandarizada una prueba de antibiograma para esta bacteria. Asímismo, aún no se conocen los mecanismos de resistencia ni las secuencias de los genes asociados a ellas en cepas nativas circulantes de Bartonella bacilliformis. Por ello, el objetivo fue caracterizar molecularmente los genes asociados a la resistencia antimicrobiana en cepas circulantes en zonas endémicas para evaluar si presentan o no mutaciones en estos genes. Se estandarizó una prueba de antibiograma utilizando la cepa B. bacilliformis CIP 57.18 colocándose los discos de antibióticos comerciales: ciprofloxacina (CIP, 5 µg), rifampicina (RD, 30 µg), eritromicina (E, 15 µg), gentamicina (CN, 15 µg), doxiciclina (DO, 30 µg), cloranfenicol (30 µg), ácido nalidíxico (AN, 5 µg) y levofloxacina (LVX, 5 µg). Todas las cepas ensayadas mostraron resistencia al ácido nalidíxico pero sensibilidad a ciprofloxacina, a excepción de la cepa USM-LMM-002 que presentó susceptibilidad disminuida a ciprofloxacina. El análisis de las proteínas que codifican los genes gyrA y parC implicados en la resistencia a estos antibióticos, determinó que ambos presentan una diferencia aminoacídica (Ser83 por Ala) en la región del QRDR en relación a la GyrA y ParC de E. coli. Interesantemente, esta Ala83 en GyrA y ParC sólo proporciona resistencia a ácido nalidíxico y no a ciprofloxacina, siendo necesaria la acumulación de mutaciones en gyrA para la resistencia a ciprofloxacina. Para los demás antibióticos, las cepas fueron sensibles y en el secuenciamiento de los genes (rpoB, L4 y 16S ribosomal) asociado a dichas resistencia no se encontró ninguna mutación. La resistencia constitutiva al ácido nalidíxico es una propiedad de B. bacilliformis, y sería un buen indicador de la susceptibilidad a las fluoroquinolonas pero su resistencia no está relacionada a la resistencia de otras fluoroquinolonas. Además, la sensibilidad a otros antibióticos como doxiciclina, rifampicina, cloranfenicol y gentamicina podría indicar alternativas en el tratamiento de esta enfermedad aunque ensayos clínicos serian necesarios.
Desarrollo de un sistema de cultivo y medición de las fases iniciales de formación de biopelícula en Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2022) Valdivia del Aguila, Erika Violeta; García de la Guarda, Ruth Hortensia; Guerra Giraldez, Daniel
Desarrolla un método sencillo de cuantificación en tiempo real de la adherencia y crecimiento de biopelícula Pseudomonas aeruginosa. Se evaluó incubaciones desde 10 minutos hasta 48 horas y en intervalos se midió la absorbancia y fluorescencia retirando previamente la forma planctónica antes de cada lectura e incorporando medio de cultivo estéril. Los datos de las lecturas se compararon con la tinción con cristal violeta realizada al final de cada experimento. El análisis visual de los resultados de tinción fue complementado con el registro fotográfico y la cuantificación de la proporción de píxeles coloreados por encima de un umbral de intensidad. Los resultados nos indican que en un tiempo mínimo de 10 minutos hay suficientes bacterias adheridas que formarán posteriormente una biopelícula madura. Los datos de absorbancia comparados con la tinción no se correlacionan, mientras que los datos de fluorescencia si muestran correlación con la proporción de biopelícula detectada por el análisis de las fotografías post-tinción. Consideramos que la fluorescencia debida a la producción de pioverdina permite medir el crecimiento de la biopelícula en tiempo real. Este método tendría la ventaja de no dañar a las bacterias durante un experimento que puede registrar el crecimiento de biopelícula en forma semi-cuantitativa hasta por 48 horas sin necesidad de ninguna tinción. Consideramos que esta técnica puede ser de utilidad para estudios orientados desentrañar los mecanismos de la formación de biopelículas o a la búsqueda de estrategias para evitar su crecimiento temprano.
Determinación de la frecuencia del gen CTX-M QUE CODIFICA β-lactamasa de espectro extendido (BLEE) EN Escherichia coli uropatógenas aisladas en el Hospital Guillermo Almenara de marzo a mayo del año 2012
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2015) Méndez Ruiz, Ema Alexandra; García de la Guarda, Ruth Hortensia
De todas las infecciones, las del tracto urinario (ITU) son después de las infecciones de las vías respiratorias, las más frecuentes en la atención primaria. Los patógenos que causan estas infecciones son varios, pero el más común es Escherichia coli. Entre los antibióticos usados en el Perú para la terapia de las infecciones urinarias destacan las cefalosporinas y el mecanismo más importante de resistencia a estos antibióticos en las enterobacterias es la producción de betalactamasas de espectro extendido (BLEE). Hay varios tipos de BLEE, entre ellas las TEM, SHV y OXA, pero en 1989 se encontró un aislado clínico de Escherichia coli que producía una encima diferente a éstas a la que se le denominó CTX-M por su actividad hidrolítica preferente sobre cefotaxima. Las BLEE de tipo CTX-M han requerido relevancia epidemiológica por su dispersión intra y extrahospitalaria. Se han hecho investigaciones que demuestran que los aislados de E. coli productores de BLEE tipo CTX-M son prevalentes en Sudamérica, sin embargo en el Perú son pocos los estudios realizados al respecto. El objetivo de este estudio fue determinar a nivel fenotípico y molecular la presencia y frecuencia de genes que codifica BLEE del tipo CTX-M en cepas de E. coli provenientes de urocultivos. En un estudio observacional. Se colectaron 50 cepas de E. coli provenientes de urocultivos del Hospital Guillermo Almenara Irigoyen (HNGAI) entre marzo y mayo del 2012. Se confirmó la identificación de los aislados y se realizó el antibiograma mediante la técnica de Kirby - Bauer. La determinación de la producción de BLEE se hizo siguiendo los criterios del CLSI así como el método de Jarlier. Las plásmidos se extrajeron con el kit Pure Yield ™ Plasmid Miniprep System, Novagen. El gen blaCTX-M se evidenció mediante amplificación por PCR, visualizándose mediante electroforesis horizontal en gel de agarosa al 1%. Se determinó que el 58.3% de E. coli aisladas de urocultivos eran productoras de BLEE, de las cuales el 85.7% presentaron el gen de resistencia blaCTX-M en plásmidos. Se concluye que el principal mecanismo de resistencia en Escherichia coli aisladas de urocultivos del HNGAI, entre marzo y mayo del 2012, es la producción de BLEE, siendo el tipo CTX-M de elevada frecuencia (85.7%). Esto concuerda con lo reportado en otros países y es un conocimiento que aporta información valiosa que debe tomarse en cuenta para vigilar el progreso de la resistencia a los antibióticos en nuestro país. Palabras clave: BLEE, blaCTX-M, ITU, PCR y UPEC.
Determinación fenotípica de enterobacteriáceas productoras de betalactamasas de espectro extendido en muestras de heces de pacientes ambulatorios en el Hospital Nacional Docente Madre Niño “San Bartolomé”
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2013) Molina Carpio, María del Carmen; Soto Pastrana, Javier Orlando; García de la Guarda, Ruth Hortensia
Detecta fenotípicamente las enterobacteriáceas productoras de BLEE en muestras de pacientes ambulatorios en el Hospital Nacional Docente Madre Niño “San Bartolomé”. Otros objetivos fueron que determina la capacidad del agar Karmali para la detección de bacterias productoras de BLEE, la frecuencia de las enterobacteriáceas más comunes que presentan BLEE y, finalmente, determina también mediante una regla empírica el tipo de BLEE. Entre abril y octubre del 2011 fueron analizadas 233 muestras de heces correspondientes a pacientes ambulatorios que presentaban problemas gastrointestinales que procedían de Unidad de Rehidratación Oral del HONADOMANI “San Bartolomé”. De las placas de agar Karmali se seleccionaron las colonias que presentaban las características de enterobacteriáceas, para purificarlas en Mac Conkey y luego identificarlas con pruebas bioquímicas en tubo. Para la detección de BLEE se tomó en cuenta los criterios de la CLSI 2010 y el método de Jarlier de la SFM que incluía discos de AMC, CTX CAZ y ATM en Müller Hinton; finalmente para la diferenciación del tipo de BLEE se tomó en cuenta la regla empírica de Jacoby, et al. (2006); donde se relaciona la medida del diámetro del disco de CTX con el diámetro del disco de CAZ. Al finalizar el estudio de las 149 enterobacteriáceas con fenotipo BLEE se pudo determinar, 128 E. coli, 11 Klebsiella pneumoniae, 4 Proteus mirabilis, 3 Enterobacter cloacae, 2 Shigella sonnei “D“, 1 Proteus vulgaris, que representaron 85.9% (128/149), 7.4% (11/149), 2.7% (4/149), 2% (3/149), 1.3% (2/149), 0.7% (1/149). Finalmente, se logró identificar presuntivamente el tipo de enzima β-lactámica mediante una regla empírica, encontrando 85 (57%) CTX-M y 64 (43%) TEM o SHV.
Evaluación de la actividad antibacteriana de membranas electrohiladas funcionalizadas con nanopartículas de plata, óxido de zinc y extractos vegetales para su uso en respiradores de protección personal tipo N95
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2022) Gambini Valderrama, Paolo Marcelo; García de la Guarda, Ruth Hortensia
Determina la actividad antibacteriana de las membranas de PVDF funcionalizadas con nanopartículas de plata (Ag NP), nanopartículas de óxido de zinc (ZnO NP) y extractos vegetales microencapsulados. Comparar la actividad antibacteriana de las membranas de PVDF funcionalizadas con la de las membranas obtenidas de las mascarillas comerciales que indican tener actividad inhibitoria.
Evaluación de la actividad bactericida de los desinfectantes green desinfectant, forward e hipoclorito de sodio en cepas ATCC y cepas aisladas de superficies de áreas quirúrgicas de dos clínicas de Lima
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2017) Elias Paredes, Joel Carlos; García de la Guarda, Ruth Hortensia
Evalúa la eficiencia de los desinfectantes de uso clínico frente a las bacterias patógenas oportunistas presentes en las superficies del área de quirófano de dos instituciones hospitalarias, con la finalidad de realizar el diseño de un plan de desinfección adecuado y la rotación de desinfectantes en su uso en cada hospital, lo cual contribuirá a la prevención de IIH.
Prevalencia de enterobacteriáceas productoras de betalactamasas de espectro extendido (Blee) en la clínica Good Hope durante el periodo marzo – agosto del 2012
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2013) Paredes Gago, Rolando; García de la Guarda, Ruth Hortensia
Las infecciones con BLEE han experimentado importantes cambios epidemiológicos en los últimos tiempos y actualmente la atención se centra en el aumento de infecciones y colonizaciones en pacientes procedentes de la comunidad. La principal repercusión clínica de las BLEE parece ser la mayor frecuencia con la que estos pacientes con infecciones graves reciben un tratamiento empírico inadecuado (García et al., 2011). Por la problemática antes explicada y siendo los antibióticos betalactámicos las drogas más utilizadas para el tratamiento de infecciones bacterianas tanto a nivel ambulatorio como a nivel hospitalario, es que se planteó el presente estudio orientado a determinar la prevalencia de enterobacteriáceas productoras de BLEE en la Clínica Good Hope durante el periodo Marzo – Agosto del 2012, a fin de generar conocimientos sobre la magnitud y distribución de este tipo de bacterias resistentes y contribuir en la vigilancia de la resistencia a los antimicrobianos.
Relación de la resistencia antimicrobiana con la presencia de plásmidos en cepas de Acinetobacter baumannii aisladas de pacientes internados del Hospital Nacional Guillermo Almenara Irigoyen- Lima 2012
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2015) Garcia Rivera, Myriam Del Carmen; García de la Guarda, Ruth Hortensia
Acinetobacter baumannii es un cocobacilo aeróbico, Gram negativo y considerado un patógeno nosocomial emergente, que ha desarrollado resistencia a múltiples fármacos. El presente trabajo tuvo como objetivo determinar la resistencia antimicrobiana de cepas de Acinetobacter baumannii aisladas de pacientes internados en el Hospital Nacional Guillermo Almenara Irigoyen y relacionarlo con la presencia de plásmidos, así como determinar la prevalencia de esta especie en dicho nosocomio según el servicio de hospitalización, tipo de muestra, edad, sexo y factores de comorbilidad, mortalidad y estacionalidad. Se identificaron 40 cepas de A. baumannii de origen clínico aisladas de muestras de pacientes hospitalizados del nosocomio Guillermo Almenara Irigoyen durante enero-diciembre del 2012. Las cepas fueron identificadas mediante el sistema automatizado Micro Scan y el método convencional. Se utilizo Agar MacConkey y Agar Leeds Acinetobacter, incubándose a 37 y 44°C respectivamente, en la coloración Gram se observaron cocobacilos Gram negativas, se hicieron pruebas bioquímicas como TSI, citrato y gelatina además de la pruebas de oxidasa y catalasa. Se realizó la sensibilidad antimicrobiana a través del sistema automatizado Micro Scan y el método de difusión en disco. El 100% de las cepas mostraron resistencia a cefalosporina de tercera generación, meropenem, imipenem, ciprofloxacino, ticar/Ac. clavulánico. El 93.5% fueron resistentes a cefepime y sulfametoxazol-trimetoprim, el 95 % a levofloxacino, el 90% a amikacina, el 45% a gentamicina, el 37.5% a tobramicina y el 30% a tetraciclina. Se registraron 12 antibiotipos de resistencia, con una mayor frecuencia en el servicio de Unidad de cuidados Intensivos. Se determinó el perfil plasmídico de las cepas estudiadas, obteniendo 31 perfiles según el número y tamaño de las bandas, que oscila entre 1,240 - 55,459 pb aproximadamente; luego se relacionó con los patrones de resistencia y el origen de aislamiento de la cepa. Además se realizó la curación de las cepas con bromuro de etidio a una concentración del 300 µg/ml. Las cepas que perdieron la resistencia fueron interpretadas como portadoras de resistencia plasmídica a los determinados antibióticos. Además se determinó una prevalencia del 7.42% de total de bacterias gram negativas aisladas, presentando un mayor número de casos en los meses de verano e invierno, con una misma proporción para ambos sexos, la edad promedio de los pacientes infectados fue 62.314±19.745. A.baumannii se aisló principalmente de muestras respiratorias, seguida de hemocultivos y líquidos biológicos provenientes del servicio de UCI, Medicina Interna 1 y Cirugía General 5. Las infecciones se asociaron a pacientes con estados de inmunosupresión debido a procesos quirúrgicos y enfermedades base como cáncer, insuficiencia hepática crónica, insuficiencia renal y EPOC. La tasa de mortalidad asociada a la infección fue del 56.4%.

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