EP Microbiología y Parasitología

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Aislamiento e identificación de hongos a partir de Anopheles albimanus (diptera: culicidae) procedente de Trujillo, La Libertad (Perú)
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2016) Calle Pacheco, Gabriela Lesli; Castellanos Sánchez, Pedro Luis
Aisla e identifica hongos del mosquito Anopheles albimanus, con la finalidad de que sean probados y aplicados como potenciales entomopatógenos en otros estudios para el control de Malaria. Las colectas de mosquitos Anopheles albimanus, se realizaron en criaderos temporales ubicados en las localidades de Laramie y Verdun del departamento de La Libertad. Las muestras se procesaron en laboratorio de Referencia Regional de Trujillo. Para el aislamiento de hongos se realizó desinfecciones a los cadáveres de mosquitos (larvas, pupas y adultos) con Hipoclorito de sodio al 5% durante 1 minuto; posteriormente los especímenes se mantuvieron en cámaras húmedas a temperatura ambiente hasta visualizar crecimiento de micelio; la siembra de micelio se realizó en Agar Extracto de Malta, los hongos se identificaron aplicando la técnica de microcultivo, utilizando las características morfológicas microscópicas y macroscópicas. Se aislaron un total de 32 cepas de hongos. El 75% (24) de cepas se obtuvo a partir de adultos, 22% (7) de larvas y 3% (1) de pupas. Los géneros identificados son: Nigrospora (25%), Cladosporium (19%), Acremonium (15%), Fusarium (15%), Aspergillus (9%), Bipolaris (9%) y Alternaria (6%).
Aislamiento, identificación y evaluación de la actividad antagonista de Trichoderma spp frente a Rhizoctonia Solani de una zona cafetalera del centro poblado de Collicate, departamento Amazonas
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2013) Gamboa Villavicencio, Marina Esther; Castellanos Sánchez, Pedro Luis
Evalúa la actividad antifúngica de aislamientos de Trichoderma spp frente a cepas nativas de Rhizoctonia solani, un fitopatógeno causante de muchas enfermedades en plantas de interés económico. En el cultivo del café, se reporta a Rhizoctonia solani como el hongo patógeno causante de damping off en plantas de vivero. El control de este patógeno se realiza hasta nuestros días con agroquímicos: Benzomyl, Rhizolex-T y Homai WP, ocasionando problemas ambientales. En el presente trabajo, se colectaron 7 muestras de hojas de café enfermas, 1 muestra de tallo de planta enferma y 27 muestras de suelo, en dos fincas cafetaleras del centro poblado Collicate, en el distrito de Bagua Grande, Provincia de Utcubamba, departamento de Amazonas, durante los meses de Marzo y Junio del 2012, de las cuales se aislaron e identificaron 22 cepas de Trichoderma spp y 28 cepas de R. solani. En la evaluación de la actividad antagonista de las 22 cepas de Trichoderma spp se empleó el método de enfrentamientos duales a 25ºC, para demostrar el grado de antagonismo con cada una de las cepas de R. solani, se seleccionaron cuatro cepas: AS-79, AS-121, AS-124 y AS-168, que presentaron los mayores porcentajes de área ocupada sobre el patógeno; mediante el método Precolonizado de Placas a 25ºC y 30ºC se evaluó la actividad antagonista sobre Rhizoctonia solani (AH-11 y AH-16), la cepa AS-121 presentó el mayor porcentaje de área ocupada sobre los fitopatógenos a las dos temperaturas.
Detección de Phytophthora cinnamomi en raíces de Persea americana “palto“ por Nested-PCR
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2015) Ortega Ramírez, Eddy; Castellanos Sánchez, Pedro Luis
Establece una metodología de detección de ADN de Phytophthora cinnamomi en muestras de raíces de Persea americana “palto” procedente del Sector III del Proyecto Especial CHAVIMOCHIC, La Libertad-Perú. Se establece un protocolo de amplificación de regiones del espaciador transcrito interno (ITS) del ADNr por Nested-PCR, que permite el diagnóstico rápido y confiable de P. cinnamomi. Los iniciadores PPF/PPR específicos del orden Pythiales se emplean en la primera reacción de PCR (Simple-PCR), mientras que los iniciadores PcinnF/PcinnR específicos de P. cinnamomi se usan en la segunda reacción de PCR (Nested-PCR). La estandarización de las pruebas de amplificación se realiza a partir de ADN extraído de micelio en cultivo puro de la cepa FM2C1R1 aislada previamente de la zona de estudio. Se obtienen amplificaciones del ADNr de P. cinnamomi por Simple-PCR desde 100 ρg de ADN extraído de raíces; mientras que en Nested-PCR es posible desde los 10 ρg del ADN previamente amplificado. El método de extracción y amplificación a partir de ADN de raíces es suficientemente sensible para detectar al patógeno sin necesidad de mayores purificaciones del ADN extraído. La dilución del ADN extraído o el incremento de la concentración de MgCl2 en la reacción no mejoran considerablemente la visualización de amplicones. De un total de 30 muestras de raíces de palto analizadas en el área de estudio, 22 resultan positivas para el patógeno en Nested-PCR. La confiabilidad de la Nested-PCR es verificada mediante secuenciación de los productos de amplificación y análisis filogenético. Esta investigación es la primera en establecer una metodología de detección de ADN de P. cinnamomi en raíces de palto y proporciona una herramienta molecular aplicable para la prevención y monitoreo del patógeno en el cultivo de palto.
Estudio taxonómico de las larvas de Prodiplosis sp. (Diptera: Cecidomyiidae) plaga clave del cultivo del espárrago utilizando como marcador la secuencia parcial citocromo oxidasa C sunb. I
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2014) Ureta Sierra, Cledy; Castellanos Sánchez, Pedro Luis
Analiza las secuencias nucleotídicas parciales del gen citocromo oxidasa c subunidad I de larvas de Prodiplosis sp. colectadas en el cultivo del espárrago, en la provincia de Virú, departamento de la Libertad , para determinar su ubicación taxonómica a nivel de familia. Se logró amplificar una secuencia de 439 pb, para la región parcial del gen de citocromo oxidasa c sub. I, esta sección coincidió con las posiciones 1752 a 2190 del genoma mitocondrial de Drosophila yakuba. En el análisis del DNA de Prodiplosis sp. se obtuvo tres tipos de secuencias que se diferenciaron en 13 pb (439) determinadas como Haplotipos. La construcción del árbol filogenético por el método de Neighbor-Joining (NJ) confirmó que Prodiplosis sp. esta estrechamente relacionada con las otras especies de la familia Cecidomyiidae, por lo que se concluye de este estudio, que utilizando los iniciadores C1-J1751 y C1-N219 es posible amplificar la secuencia parcial del gen de citocromo oxidasa c sub. I en Prodiplosis sp. y constituye una herramienta muy útil para conocer su relación filogenética.
Evaluación de hongos resistentes a Cr (VI) y Zn (II) y su capacidad de bioadsorción en solución acuosa, aislados de ambientes mineros cercanos al río Yauli, Junín
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2012) Meza Mendoza, Patricia del Carmen; Castellanos Sánchez, Pedro Luis
El Perú ocupa un lugar importante en Latinoamérica y el mundo en la producción de minerales. La región Junín es una zona con gran actividad minera polimetálica pero también con una excesiva descarga de aguas ácidas que contaminan el ambiente. Ante este problema, el proceso de biosorción es propuesto como una alternativa prometedora para la eliminación de contaminantes. En el presente trabajo, se aislaron y seleccionaron hongos resistentes a Cr (VI) y Zn (II) de ambientes mineros cercanos al río Yauli-Junín, y se determinó su capacidad de bioadsorción por el método de la difenilcarbazida y espectrofotometría de absorción atómica (EAA). De un total de 46 cepas aisladas, los hongos Penicillium sp (M2S2) y Paecilomyces sp (M6A3), alcanzaron valores máximos de CMI de 1200mg/L y 4000mg/L para los metales Cr (VI) y Zn (II) respectivamente, mostrando una eficiente capacidad de bioadsorción en soluciones mono y bimetálicas. En soluciones monometálicas, se determinó una eficiencia de bioadsorción máxima de 88.89% para el metal Cr (VI) por el hongo Paecilomyces sp y 75.14% para el metal Zn (II) por el hongo Penicillium sp. La eficiencia de bioadsorción por el hongo Paecilomyces sp en soluciones bimetálicas fue mayor al 65% para ambos metales, siendo superior para el metal Zn (II) con un valor de 72.82%. La máxima eficiencia de bioadsorción para los metales Cr (VI) y Zn (II) fue alcanzada a las 48 horas, y en los tres tiempos evaluados se obtuvieron diferencias significativas (p<0.05).
Evaluación de la actividad celulolítica del complejo enzimático celulasa en cepas fúngicas de los departamentos de Cajamarca, Lima, Junín, Huánuco
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2012) Llacza Ladera, Henry Frans; Castellanos Sánchez, Pedro Luis
Mundialmente los residuos lignocelulósicos constituyen el recurso renovable más importante que existen y está compuesto en su mayor parte por celulosa la que es degradada principalmente por hongos. En el Perú se conoce poco acerca del potencial celulolítico de las cepas fúngicas nativas en las distintas regiones de nuestro país. Este trabajo tuvo como objetivo seleccionar cepas fúngicas productoras de celulasas de los mantenidos en el cepario del laboratorio de micología aplicada, identificarlas morfológicamente y evaluar su actividad enzimática. Se evaluaron 289 cepas semicuantitativamente mediante la técnica de difusión radial en agar czapeck Na-CMC y cuantitativamente por el método de Somogy Nelson. Se seleccionaron cinco cepas: tres del genero Paecilomyces sp (SA – 726; SA - 668; SA – 651), una de Fusarium sp (SA - 683) y una de Aspergillus sp HN – 566), los que presentaron áreas de hidrólisis de 14.9; 12.5, 12.0, 14.4 y 12.7 x 10² mm² respectivamente. La actividad enzimática de las cepas seleccionadas mostró los siguientes valores: 0.048, 0.042, 0.042, 0.080 y 0.048 UI/mL respectivamente. Los resultados muestran que existen cepas nativas en las zonas de Satipo y Huancayo con buena actividad enzimática, las cuales tienen un alto potencial para la producción o la investigación. Palabras claves: Celulasas, Czapeck, difusión radial, Somogy Nelson, actividad enzimática.
Evaluación de la tolerancia de cuatro cepas de Beauveria sp. entomopatógenas a factores abióticos adversos
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2012) Mallqui Crispín, Yesenia Leila; Castellanos Sánchez, Pedro Luis
Evalúa la tolerancia de cepas nativas de Beauveria sp. (PR11, PR8, SR4) y Beauveria bassiana Bb CCBLE-216 (Bb) a diferentes niveles de temperatura, humedad relativa y a diferentes concentraciones del fungicida mancozeb. Para ello, se determinó la producción de esporas, la tasa de crecimiento micelial y el porcentaje de germinación a 9 -11° C/60 -70% HR, 20-25° C/60-70% y 30-32 ºC/50-54% HR, así como el número de Unidades Formadoras de Colonias (UFC) en Agar Extracto de Malta con fungicida mancozeb en suspensión concentrada (480 g/L) al 0.3%, 0.5% y 0.6%. Se determinó que la cepa PR11 es tolerante a bajas y altas temperaturas y también a baja humedad por no haberse observado diferencias significativas con el control (p<0.05), la cepa Bb fue tolerante a 9-11° C mientras que las cepas SR4 y PR8 no toleraron las condiciones ambientales adversas, notándose, sin embargo, que la cepa SR4 alcanza altos valores en los parámetros evaluados a 20-25° C. Todas las cepas fueron sensibles a dosis comerciales de mancozeb. La cepa PR11, anteriormente seleccionada por su alta capacidad entomocida, obtuvo los mejores resultados y toleró las condiciones de temperatura y humedad evaluadas.

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