EP Microbiología y Parasitología

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Estudio del efecto del fucoidan de Lessonia trabeculata nativa (alga parda) sobre la capacidad migratoria y clonogénica de la línea celular de carcinoma mamario murino 4T1
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2020) Toccas Salas, Mary Luz; Alzamora Gonzales, Libertad
El fucoidan es un polisacárido sulfatado presente en las algas pardas, cuya estructura y composición varía entre las diferentes especies de algas y se ha demostrado que posee efectos anticancerígenos, entre otros. El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto del fucoidan de Lessonia trabeculata (FLt) sobre la capacidad migratoria y clonogénica de la línea celular de carcinoma mamario murino 4T1. Se determinó la citotoxicidad de FLt mediante el ensayo MTT; se calculó la IC50 (concentración que inhibe el 50% de la población) y el índice de selectividad (IS). Como controles de actividad se consideraron el estándar de fucoidan de Fucus vesiculosus (FFv) y el quimioterápico doxorrubicina (Dox). Las células VERO-76 fueron empleadas como control de células normales. Se realizó el ensayo de migración celular por el método de “cierre de herida” y el ensayo clonogénico considerando 3 concentraciones de FLt, seleccionadas a partir de su IC50. Los resultados muestran que el FLt redujo la viabilidad celular de 4T1, con una IC50 de 950 µg/mL, y ejerció menor toxicidad sobre VERO-76, demostrando toxicidad selectiva sobre 4T1 (IS= 3.15). El FFv ejerció menor efecto citotóxico sobre ambas líneas celulares. El FLt inhibió significativamente y de manera dosis-dependiente la migración celular y la capacidad clonogénica o formación de colonias de 4T1 en concentraciones de 700, 950 (IC50) y 1200 µg/mL respecto al control no tratado (p<0.0001) a las 12 y 24 h de exposición. Adicionalmente se consideró el tratamiento combinado [Dox + FLt] IC50, demostrándose que el FLt IC50 incrementa la efectividad de doxorrubicina sobre 4T1. Se concluye que el FLt tiene el potencial de inhibir la proliferación, migración y capacidad clonogénica de 4T1 in vitro de manera selectiva y dosis-dependiente.
Evaluación de los efectos de la quitina en la respuesta inmune humoral y celular innata de especímenes juveniles Oncorhynchus mykiss desafiados con la cepa estándar Flavobacterium psychrophilum NMCD 1947T
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2010) Hurtado Lévano, Pablo César; Alzamora Gonzales, Libertad
La acuicultura es una de las áreas de mayor prioridad para el desarrollo de nuestro país, sin embargo, existen muchos aspectos en los cuales no se ha investigado y otros en los que se está iniciando, como es el caso del uso de inmunoestimulantes para lograr mejores resultados en la producción de algunas especies de importancia económica. Uno de los inmunoestimulantes investigados en peces dulceacuícolas es la quitina, que administrada como suplemento dietético potencia la respuesta inmune previniéndoles del ataque de agentes patógenos como Flavobacterium psychrophilum. El objetivo de la investigación fue evaluar la actividad inmunoestimulante de la quitina, administrada por vía oral a juveniles de trucha arco iris (Oncorhynchus mykiss) en condiciones de inmunocompetencia e inmunosupresión y posteriormente desafiados con la cepa estándar F. psychrophilum 1947T causante de la “enfermedad del agua fría”. Para demostrar los efectos de la quitina se evaluaron parámetros de la inmunidad innata celular (actividad fagocitaria y producción de óxido nítrico) y humoral (complemento por vía alternativa y lisozima sérica). Además, se determinó el tiempo necesario de tratamiento con quitina para lograr una adecuada inmunoestimulación. Las truchas fueron alimentadas con pienso suplementado con quitina y sin ella (n=20 en cada caso) durante 2 y 4 semanas. La quitina se incorporó a la dosis de 100g/Kg de alimento, el mismo que fue suministrado a la proporción del 1% de la biomasa. Luego del tratamiento los dos grupos fueron inmunosuprimidos con ciclofosfamida y desafiados por vía intramuscular. Se concluye que existe una mejora significativa en la producción de óxido nítrico y la actividad de lisozima sérica de los peces inmunosuprimidos y tratados con quitina en comparación con los peces inmunocompetentes y los no tratados. El complemento por vía alternativa y la actividad fagocitaria in vitro no mostraron variaciones significativas para ambos grupos desde las dos semanas de tratamiento.
Evaluación del efecto inmunomodulador del fucoidan VITALG® de Lessonia trabeculata nativa sobre la producción de inmunocitoquinas por esplenocitos en dos tipos de tratamiento para carcinoma mamario 4T1
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2022) Condori Macuri, Rosa María; Alzamora Gonzales, Libertad
El fucoidan de algas pardas es un polisacárido sulfatado con amplia variedad de actividades biológicas, entre ellas la modulación de la respuesta inmunitaria a través de la producción o inhibición de citoquinas, por lo cual, su uso en la terapia combinada con quimioterápicos convencionales contra distintos tipos de cáncer ha sido postulado en diversos estudios. El objetivo fue demostrar la inmunomodulación producida por el fucoidan VITALG® de L. trabeculata (FLt) sobre heteroesferoides sometidos a tratamiento combinado (doxorrubicina + fucoidan) y tratamiento simple (solo fucoidan), verificado mediante la producción de citoquinas. Ambos tratamientos fueron planteados en base a las IC50 de FLt y doxorrubicina (control positivo), los cuales se hallaron mediante el ensayo MTT, utilizando homoesferoides de células 4T1. Los heteroesferoides estuvieron compuestos de células 4T1 y esplenocitos BALB/c, se determinó el número y proporción de células necesarios para su formación, y las citoquinas se identificaron a partir de sus sobrenadantes, mediante ensayos de ELISA. Los valores de IC50 para FLt y doxorrubicina fueron 428 μg/mL y 2 μg/mL, respectivamente. Además, se observó la deformación de los homoesferoides como consecuencia de la acción citotóxica de los tratamientos. La estandarización de los heteroesferoides 4T1:esplenocitos se consiguió con 1x104 células totales, en una proporción de 10:1. Los tratamientos probados incrementaron TNF-α e IL-6, y redujeron IL-10 y TGF-β, lo que indica la promoción de la respuesta proinflamatoria con la consecuente inhibición de la antiinflamatoria. No se reportó incremento de IFN-γ, IL-2, IL-4 e IL-5. Se concluye que el fucoidan VITALG® de L. trabeculata, en tratamiento combinado o simple, promueve la producción de citoquinas de inmunidad celular.
Expresión de citoquinas proinflamatorias por monocitos humanos infectados con dos especies de Leishmania en presencia de lectinas hemaglutinantes del ecotipo patón grande de Lupinus mutabilis sweet (Tarwi)
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2017) Arone Farfán, Ricardo; Alzamora Gonzales, Libertad
Determina el efecto de las lectinas hemaglutinantes de Lupinus mutabilis (tarwi) en la activación y expresión de citoquinas proinflamatorias en monocitos humanos infectados con Leishmania peruviana y Leishmania braziliensis. Se procedió a purificar las lectinas del extracto de semillas de L. mutabilis mediante dos métodos cromatográficos: exclusión molecular seguido de intercambio aniónico. Para el aislamiento de monocitos humanos de sangre periférica se diseñó y aplicó un método de separación seriada empleando dos polímeros de distintas densidades. El cultivo de monocitos fue tratado con diferentes dosis de fracción de lectinas hemaglutinantes (FrPG) obtenidas por cromatografía de exclusión molecular y lectina purificada (LP) obtenida por cromatografía de intercambio aniónico. Se evaluó la viabilidad celular, producción de anión superóxido y liberación de óxido nítrico. Las concentraciones óptimas de FrPG y LP fueron probadas en cultivos de monocitos humanos infectados con L. peruviana y L. braziliensis, en los que se evaluó la expresión de citoquinas proinflamatorias. Las concentraciones de 50, 75 µg/ml de FrPG y 20 µg/ml de LP produjeron el incremento significativo de la producción de anión superóxido en cultivo de monocitos no infectados. La producción de anión superóxido en monocitos previamente tratados e infectados con L. peruviana fue significativa con 75 µg/ml de FrPG y 20 µg/ml de LP, mientras que en monocitos infectados con L. braziliensis solo se presentó con 20 µg/ml de LP. No se produjo liberación de óxido nítrico en ninguna de las concentraciones de FrPG y LP en los cultivos de monocitos no infectados o infectados con las especies de Leishmania evaluadas. Se incrementó la expresión génica de mRNA para IL-1α y TNF-α solo en los cultivos de monocitos infectados con L. peruviana en presencia de LP a 20 µg/ml. Se concluye que el tratamiento con lectina purificada de tarwi induce la producción de anión superóxido en monocitos no infectados e infectados con L. peruviana y L. braziliensis y favorecen el incremento de la expresión de citoquinas proinflamatorias solo en monocitos infectados con L. peruviana.
Identificación de apoptosis en células THP-1 Y LLC-MK2 inducida por antígenos de dos cepas de Trypanosoma cruzi
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2015) Paico Montero, Henry Alonso; Alzamora Gonzales, Libertad; Verástegui Pimentel, Manuela Reneé
Evalúa la calidad microbiológica de aguas subterráneas (pozos), utilizadas para el consumo humano ubicadas en el Centro Poblado de Santa María de Huachipa en el distrito de Lurigancho, Lima. Se recolectaron treinta y cuatro muestras de aguas subterráneas (pozos). Para la determinación de Coliformes Totales, Escherichia coli, y Enterococcus sp., el análisis es realizado con la técnica del Número Más Probable (NMP), para bacterias heterotróficas y Pseudomonas aeruginosa, se emplean los métodos de recuento en placa y filtración de membrana respectivamente. En los resultados se observan valores superiores a los límites establecidos por el MINAM-2008, DIGESA y Código Alimentario Argentino, encontrándose que el 74% (25) de las muestras de agua supera el parámetro de bacterias heterotróficas (máximo 500 UFC/mL), el 100% (34) de las muestras de agua no cumple con el parámetro para coliformes totales (< 1,8 NMP/100mL o ausencia), y el 53% (18) de las muestras de agua supera los límites establecidos para Escherichia coli (< 1,8 NMP/100mL o ausencia). En el caso de Enterococcus sp. (< 1,8 NMP/100mL o ausencia) el 85% (29) de las muestras de agua supera el límite permisible; y el 53% (18) de las muestras presentó Pseudomonas aeruginosa (< 1 UFC/100mL o ausencia). Se concluye que ninguna muestra de agua cumple con los requisitos microbiológicos para ser aceptable como aguas de consumo humano, constituyendo un riesgo potencial para la salud de los consumidores debido a los elevados niveles de contaminación microbiana.
Investigación de proteínas con actividad inmunomoduladora procedentes de algas marrones
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2022) Urbina Ayala, Estela; Alzamora Gonzales, Libertad
Realiza una investigación documental sobre las proteínas y péptidos con actividad inmunomoduladora presentes en las algas marrones y su importancia como alimento nutracéutico y funcional. Para ello se realizó la revisión de la literatura científica existente en las principales bases de datos y se sistematizó la información acerca de los biopéptidos presentes en las algas marrones que tengan actividad inmunomodulador. Se ha determinado que la información se encuentra muy dispersa con muy pocos autores que han realizado estudios específicos sobre el tema; los reportes principalmente tratan acerca de su valor nutricional y en menor medida sobre su actividad inmunomoduladora.

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