EP Genética y Biotecnología

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Determinación de la competencia de desarrollo de ovocitos de alpaca luego de una premaduración por el colorante azul de cresilo brillante
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2021) Vargas Donayre, Diego Alonso; Valdivia Cuya, Martha Esther
El desarrollo de la producción embrionaria in vitro en alpaca está limitado todavía por la baja calidad inicial de los ovocitos y los sistemas de maduración usados convencionalmente. El objetivo de este trabajo fue determinar la competencia de desarrollo de los ovocitos luego de una premaduración mediante el azul de cresilo brillante (ACB). Se usaron ovarios colectados en el camal municipal de Huancavelica y transportados hacia Lima, donde fueron procesados 24 horas post mortem. Para el sistema de premaduración se usaron los ovocitos de folículos con menos de 3 mm de diámetro denominados folículos pequeños (FP), los cuales se aislaron mediante cortes del ovario. Se realizó la tinción con el colorante ACB y se clasificaron los ovocitos en BCB+ y BCB –. Se comparó la cantidad de ovocitos BCB+ antes y después de la premaduración. Además, se comparó las tasas de maduración y de activación química entre los ovocitos premaduros y los ovocitos control madurados luego de su colecta. Luego de la premaduración hubo un aumento de 66.5% de ovocitos BCB+ a 78.4%, aunque este no fue estadísticamente significativo (p>0.05). Los ovocitos premadurados tuvieron una mayor tasa de maduración que el grupo control (33.6% vs. 26.7%, respectivamente; p>0.05), aunque las tasas de activación fueron similares (47.5% vs. 40.8%; p>0.05). También se encontró que los ovocitos premaduros BCB+ tuvieron una mayor competencia de desarrollo que los BCB-, con una mayor tasa de maduración (35.4% vs 7.9%; p>0.05) y tasa de activación (47.1% vs. 0%). Se concluye que el sistema de premaduración usado en este trabajo tiene un efecto en la competencia meiótica de los ovocitos provenientes de FP. Adicionalmente, se demuestra que los ovocitos BCB+ en alpaca presentan una mayor competencia de desarrollo que los BCB-, por lo que es posible usar los ovocitos BCB+ como un marcador indirecto de la calidad ovocitaria.
Fragmentación de ADN en espermatozoides epididimarios de Vicugna pacos “ALPACA” mediante el test de dispersión de la cromatina y su potencial impacto en el desarrollo embrionario temprano
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2022) Rodríguez Castillo, Emanuel; Valdivia Cuya, Martha Esther
El fenómeno de fragmentación de ADN espermático es aquella condición en la que el ADN de las células espermáticas, frente a condiciones metabólicamente anómalas propias o inducidas por el entorno, experimentan daño estructural a nivel de la cadena nucleotídica, condicionando la supervivencia celular a la extensión del daño recibido e influyendo en la salud y el bienestar de la descendencia al fecundar un ovocito. En la actualidad, muchos embriólogos avalan la importancia de fecundar con espermatozoides con baja fragmentación espermática y por lo tanto se han venido desarrollado diversas técnicas para cuantificarlo, dentro de ellas está el ensayo de dispersión de la cromatina espermática o prueba SCD. El objetivo de este estudio fue demostrar si el empleo de la prueba SCD sirve como predictor de calidad espermática en alpacas, a la vez poder medir su implicancia en los procesos de desarrollo embrionario temprano, para el primer objetivo se procesaron 45 pares de muestras epididimarias colectadas en el Camal Municipal de Huancavelica (aprox. 3600 msnm) siendo estas analizadas en los parámetros espermáticos convencionales y mediante la prueba SCD. Para medir la implicancia de la fragmentación en el desarrollo embrionario se llevó a cabo 4 fecundaciones in vitro usando 111 ovocitos MII previamente madurados en laboratorio, separándose en grupos de evaluación según el nivel de fragmentación de la muestra espermática (Grupo A <2% IFA, Grupo B 2-4% IFA y Grupo C 4-6% IFA) y monitorizando el desarrollo a través de la observación directa en tres etapas: fecundación, formación mórulas y de blastocistos. Se obtuvo un valor promedio de la fragmentación espermática de alpaca expresado como índice de fragmentación de ADN (IFA) de 20.98 ± 32.54%, así mismo se demostró estadísticamente que el IFA puede correlacionarse positivamente con el porcentaje de espermatozoides inmóviles y negativamente con la movilidad progresiva y concentración (p<0.05). La evaluación de los estadios embrionarios solo produjo resultados comparables en el Grupo A y Grupo C encontrándose que no había diferencias significativas entre ambos grupos durante la monitorización embrionaria (p>0.05). Se concluye que es posible usar el IFA como un predictor de calidad espermática, mas el nivel de IFA usado en este trabajo no es estadísticamente significativo para evidenciar su relación con alguno de los tres estadios de desarrollo embrionario preimplantacional analizados.
Niveles de expresión de DCXR en tejido gonadal de alpacas macho
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2014) Florentini Carranza, Edgar Alejandro; Valdivia Cuya, Martha Esther
Estudia a un marcador del potencial de fertilidad, la dicarbonilo, L-xilulosa reductasa (DCXR) cuya utilidad ha sido descrita para explicar hasta el 14% de casos de infertilidad, según lo descrito en estudios clínicos para humanos. Se evalúa la expresión del gen DCXR, mediante RT-qPCR, en epidídimos de machos de alpaca en edad fértil (n = 39) y, se determinó la correlación con parámetros de fisiología espermática evaluados en el laboratorio. Al igual que en humanos, DCXR muestra asociación estadística únicamente con la capacidad de los espermatozoides de alpaca de unirse a la zona pelúcida homóloga (prueba de Spearman, p< 0,05). No se encuentra asociación significativa (prueba de Spearman, p>0,05) con otros parámetros de fisiología espermática. El gen DCXR puede, entonces, ser utilizado en alpacas macho como un marcador del potencial de fertilidad, que junto a otros marcadores moleculares, formaría parte del panel de biomarcadores predictivos para determinar el potencial de fertilidad en alpacas.

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