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Caracterización molecular de cepas aisladas de dengue 2 en Perú; 2000-2010
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2013) Cruz Malpica, Cristhopher Donat's; Monteghirfo Gomero, Mario
El virus Dengue (VDEN) es el responsable de más de 50-100 millones de casos anualmente en el mundo. La infección del dengue es causada por cuatro serotipos (VDEN-1, VDEN-2, VDEN-3 y VDEN-4) y el espectro de la enfermedad varía desde una fiebre indiferenciada, fiebre hemorrágica por dengue (FHD), síndrome de shock por dengue, y muerte. Información epidemiológica liga el desarrollo de FHD con una infección secundaria y además sugiere que ciertas cepas son más virulentas que otras. En 2001, aparecieron los primeros casos de FHD asociados con VDEN-2 en la costa del Perú. En el 2010 ocurrió un brote en Iquitos con casos severos convirtiéndose en el más largo en la historia de la región. Sin embargo estudios orientados en determinar el origen distribución y diversidad genética de cepas peruanas de VDEN-2 durante los diez últimos años no han sido realizados. Para atender este vacío de conocimiento en la epidemiología del VDEN-2 en Perú, extractos de ARN de 30 aislamientos virales en células C6/36 (Aedes albopictus) fueron procesados por RT-PCR. Secuencias del gen de la envoltura (E) fueron determinadas y comparadas con muestras globales de VDEN-2. El análisis filogenético reveló la circulación de dos genotipos en Perú: Americano (hasta el 2000) y Americano/Asiático (2000- 2010). Adicionalmente se identificaron cepas variantes del genotipo Americano/Asiático distribuidos en dos clados principales (1 y 2) que ingresaron al Perú por la costa norte (Ecuador) y por la selva (Brasil o Bolivia). Con el aparente incremento de la virulencia relacionada a cepas Americano/Asiático del clado 2, nuestros resultados soportan la necesidad de un continuo monitoreo de cepas emergentes de nuevos variantes o genotipos de dengue que podrían estar asociados a casos severos de la enfermedad. Palabras claves: Arbovirus, Dengue 2, Americano/Asiático y relación filogenética.
Estandarización de la prueba de ensayo inmunoenzimático para la detección de anticuerpos IgG en sueros de humanos para el virus Phlebotomus fever
(Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2001) Cruz Malpica, Cristhopher Donat's; Flores Juárez, Eduardo
El virus Phlebotomus fever es un arbovirus cuya transmisión al hombre ocurre por la picadura de moscas hematófagas de vuelo limitado, pertenecientes a los géneros Phlebotomus, Sergentomyia y Lutzomyia. La infección en humanos ocurre principalmente en personas que trabajan o viven en la selva. En el presente trabajo se estandarizó una prueba inmunoenzimática indirecta (ELISA) para detectar anticuerpos IgG contra el virus en sueros humanos. También se aplicó esta prueba en la determinación de la seroprevalencia de anticuerpos contra dicho virus en personas procedentes de Iquitos. La confirmación de los casos positivos se realizó mediante la Prueba de Neutralización por Reducción de Placa (PRNT). El ELISA se realizó en cuatro pasos: fijación del antígeno, reacción con el suero, adición del conjugado y reacción con el sustrato. En la producción del antígeno se utilizó la línea celular Vero E-6, siendo la dilución de trabajo 1:1500. El conjugado utilizado es un Anti IgG humano de cabra purificado y marcado con peroxidasa, siendo su dilución de trabajo 1:8 000. Se analizó con la prueba de ELISA 400 sueros procedentes de Iquitos, encontrándose una seroprevalencia de 16.25%. Al confirmar los resultados con la prueba de PRNT, el ELISA obtuvo una especificidad de 83.02% y una sensibilidad de 98.24%. ELISA desarrollado para el virus Phlebotomus fever es aplicable para realizar estudios de prevalencia.